Cutbert等發(fā)現(xiàn)缺乏內(nèi)源性和外源性膽固醇時(shí)，培養(yǎng)于僅含微量LDL營(yíng)養(yǎng)液中的人外圍血淋巴細(xì)胞，其生長(zhǎng)和增生均依賴(lài)與細(xì)胞膜表面LDL-R的存在，根據(jù)這一原理建立了3H-TdR（3H-thymidine,3H-胸腺嘧啶)摻入法檢測(cè)人淋巴細(xì)胞LDL-R的活性。楊建新等改進(jìn)了本法，減少用血量，但是未能避免使用同位素，簡(jiǎn)述止法。
檢測(cè)原理：細(xì)胞分裂增殖所需的大量膽固醇主要通過(guò)內(nèi)源性膽固醇合成，以及加速細(xì)胞膜LDL-R介導(dǎo)的特異性結(jié)合，攝取血LDL中的外源性膽固醇而獲得，當(dāng)用mevinolin(膽固醇合成的限速酶HMG-CoA還原酶的抑制劑)阻斷細(xì)胞內(nèi)源性膽固醇的合成，并使細(xì)胞外環(huán)境中LDL濃度降低至無(wú)非特異性外源膽固醇攝取時(shí)，細(xì)胞分裂生長(zhǎng)完全取決與細(xì)胞膜表面LDL-R活性，摻入3gydjdsj.org.cn/jianyan/H-TdR量與細(xì)胞生長(zhǎng)成正比例關(guān)系。
實(shí)驗(yàn)方法：采空腹靜脈血5～6ml，肝素抗凝，測(cè)血漿血脂，并分離出淋巴細(xì)胞；將細(xì)胞分成實(shí)驗(yàn)組（加含mevinolin的二甲亞礬)和對(duì)照組（加不含mevinolin的二甲亞礬)，在同樣條件下（50μg/mlPHA，5μg/mlLDL-C，37℃，5%CO2，飽和濕度)培養(yǎng)96h，分別加入0.5μCi3H-TdR，混勻后繼續(xù)培養(yǎng)6h，收集細(xì)胞至玻璃纖維紙上測(cè)cpm值。
其計(jì)算公式為：
淋巴細(xì)胞分裂抑制率（%)=（1-Δcpm實(shí)驗(yàn)組/Δcpm對(duì)照組)×100%
采用本法正常淋巴細(xì)胞分裂抑制率＜20%；FH雜合子淋巴細(xì)胞分裂抑制率＞60%，故可將FH患者與正常人以及普通的高脂血癥區(qū)別開(kāi)來(lái)。
MTT比色法是孟凡青等根據(jù)3H-TdR摻入法為避免使用同位素而改用四甲基偶氮唑鹽（MTT)建立的一種快速、方便的方法。MTT比色法僅需采空腹靜脈血1～2ml，培養(yǎng)90h后，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組分別加入MTT溶液（3mg/ml)，再培養(yǎng)2h，抽吸上清，加0.04mol/HCL-異內(nèi)醇，充分溶解，在酶標(biāo)儀上測(cè)吸光度（A)值。詳細(xì)操作流程見(jiàn)圖20-2。
.jpg)
圖20-2 MTT比色法檢測(cè)LDL-R操作流程
細(xì)胞分裂抑制率計(jì)算公式為：
淋巴細(xì)胞分裂抑制率（%)=（1-ΔA實(shí)驗(yàn)組/ΔA對(duì)照組)×100%
正常人淋巴細(xì)胞分裂抑制率為0～18%；FH雜合子淋巴細(xì)胞分裂抑制率為21%～58%；FH純合子淋巴細(xì)胞分裂抑制率為36%～60%。
經(jīng)實(shí)驗(yàn)比較MTT比色法與經(jīng)典的3gydjdsj.org.cn/pharm/H-TdR摻入法測(cè)定的結(jié)果基本相符，但是后者敏感性更強(qiáng)，可以一步將FH雜合子和FH純合子區(qū)分開(kāi)來(lái)。由于MTT比色法不需使用昂貴的儀器和同位素，用血量少，適合一般實(shí)驗(yàn)室及臨床檢驗(yàn)科室的臨床診斷，可用于人群FH篩查，這對(duì)于減少雜合子之間的婚配，降低FH發(fā)病率有重要意義。
