雞免疫酶技術(shù)的操作是怎樣的
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① NCM的處理：在NCM上劃6毫米X6毫米的方格，然后 在方格中央用直徑5毫米的圓形打孔器在膜平滑面按順序壓痕 跡，作為點樣部位，將NCM置于蒸餾水中浸泡，完全濕透后， 取出、晾干后備用。② 點樣：取2微升JOV抗原液滴于圓圈內(nèi)，自儒干燥。③ 封閉：將NCM置于封閉液（0.01摩爾/升pH 7.2 PBS加 人10%小
牛血清)中，37 C下作用1小時，取出后用洗滌液 (0.01摩爾/升PH7.2PBS加人0.05%吐溫-20)漂洗4次，每 次3分鐘。④ 將待檢血清做系列稀釋，分別為1:10、1:50、1:200、1: 400、1:800、1:1600、1:3200、、1:6400、1:12800、1:25 600,同時做陰性和陽性血清對照，將上述血清加到NCM上的點樣部 位、置濕盒中37 t下作用1.5小時，同上洗滌。⑤ 將NCM置于稀釋到工作濃度的酶標(biāo)
兔抗雞Ig G液中， 37 C下作用1小時，同上洗滌。⑥ 顯色：將NCM侵人底物溶液中，閉光作用10分鐘。⑦ 終止顯色?.將NCM置于蒸餾水中浸泡3分鐘，自然干 燥〇⑧ 結(jié)果判定：壓跡中間呈現(xiàn)棕色斑點者判定為陽性（ + ), 與陰性對照相同不呈現(xiàn)斑點者判定為陰性（-)。以出現(xiàn)陽性反 應(yīng)的血清最高稀釋度為該血清的DOT-ELISA效價。
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