實驗二十 

[目的要求]

1.證明不同微生物對各種有機大分子的水解能力不同，從而說明不同微生物有著不同的酶系統(tǒng)。

2.掌握進行微生物大分子水解試驗的原理和方法。

[實驗原理]

微生物對大分子的淀粉、蛋白質(zhì)和脂肪不能直接利用，必須靠產(chǎn)生的胞外酶將大分子物質(zhì)分解才能被微生物吸收利用。胞外酶主要為水解酶，通過加水裂解大的物質(zhì)為較小的化合物，使其能被運輸至細胞內(nèi)。如淀粉酶水解淀粉為小分子的糊精、雙糖和單糖；脂肪酶水解脂肪為甘油和脂肪酸；蛋白酶水解蛋白質(zhì)為氨基酸等。

[教學內(nèi)容]

大分子物質(zhì)的水解試驗

實驗二十一

[目的要求]

1.了解糖發(fā)酵的原理和在腸道細菌鑒定中的重要作用。

2.掌握通過糖發(fā)酵解釋的方法。

[實驗原理]

糖發(fā)酵試驗是常用的鑒別微生物的生化反應，在腸道細菌的鑒定上尤為重要。絕大多數(shù)細菌都能利用糖類作為碳源和能源，但是它們在分解糖類物質(zhì)的能力上有很大的差異。有些細菌能分解某種糖產(chǎn)生有機酸(如乳酸、醋酸、丙酸等)和氣體(如氫氣、甲烷、二氧化碳等)；有些細菌只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。例如大腸桿菌能分解乳糖和葡萄糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣；傷寒桿菌分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不能分解乳糖；普通變形桿菌分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不能分解乳糖。

[教學內(nèi)容]

糖發(fā)酵試驗

實驗二十二

[目的要求]

了解IMViC與硫化氫反應的原理及其在腸道菌鑒定中的意義和方法。

[實驗原理]

IMViC是吲哚(Indol test)、甲基紅(Methyl red test)、伏-普(Voges-Prokauer test)和檸酸鹽(Citrate test)四個試驗的縮寫，i是在英文中為了發(fā)音方便而加上去的。這四個試驗主要是用來快速鑒別大腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌(Enterobacter aerogenes)，多用于水的細菌學檢查。大腸桿菌雖非致病菌，但在飲用水中若超過一定數(shù)量，則表示受糞便污染。產(chǎn)氣腸桿菌也廣泛存在于自然界中，因此檢查水時要將兩者分開。

[教學內(nèi)容]

IMViC試驗

實驗二十三

[目的要求]

    1. 了解微生物自動鑒定系統(tǒng)的原理及其優(yōu)點

2. 學習與掌握Biolog自動鑒定的方法

[實驗原理]

要鑒定一種微生物，用傳統(tǒng)的方法需進行大量的工作，其中微生物的生理生化反應是重要的內(nèi)容之一，但所需時間很長。幾十所來，根據(jù)微生物的主要生理生化特性相應建立了許多自動鑒定卡或板。迄今，借助計算機的快速發(fā)展又創(chuàng)建了不少的微生物自動鑒定系統(tǒng)，包括自動鑒定板（卡)、和數(shù)據(jù)庫兩大部份，這樣能很方便地將鑒定卡插入計算機，判別實驗結(jié)果，并將其結(jié)果與數(shù)據(jù)庫中所收集的微生物信息進行比較，很快便確定待測菌株的分類地位

[教學內(nèi)容]

Biolog微生物自動鑒定系統(tǒng)

                         實驗二十四

[目的要求]

1.了解常用化學消毒劑對微生物的作用。

2.學習測定石炭酸系數(shù)的方法。

[實驗原理]

常用化學消毒劑主要有重金屬及其鹽類、酚、醇、醛等有機溶劑、鹵族元素及其化合物、染料和表面活性劑等。重金屬離子可與菌體蛋白質(zhì)結(jié)合而使之變性或與某些酶蛋白的巰基相結(jié)合而使酶失活；有機溶劑可使蛋白質(zhì)及核酸變性，也可破壞細胞膜透性使內(nèi)含物外溢；碘可與蛋白質(zhì)酪氨酸殘基不可逆結(jié)合而使蛋白質(zhì)失活，氯氣與水發(fā)生反應產(chǎn)生的強氧化劑也具有殺菌作用；染料在低濃度條件下可抑制細菌生長。

[教學內(nèi)容]

化學因素對微生物的影響

實驗二十五

[目的要求]

了解某一抗生素的抗菌范圍，學習抗菌譜試驗的基本方法。

[實驗原理]

生物之間的關系從總體上可分為互生、共生、寄生、拮抗等，微生物之間的拮抗現(xiàn)象是普遍存在于自然界的，許多微生物在其生命活動過程中能產(chǎn)生某種特殊代謝產(chǎn)物如抗生素，具有選擇性地抑制或殺死其它微生物的作用，不同抗生素的抗菌譜是不同的，某些抗生素只對少數(shù)細菌有抗菌作用。

[教學內(nèi)容]

生物因素對微生物的影響

實驗二十六

[目的要求]

1.了解細菌接合導致傳遺重組的基本原理。

2.學習細菌接合實驗的基本方法。

[實驗原理]

細菌接合是指供體菌與受體菌的完整細胞在直接接觸時供體菌的DNA向受體菌單向傳遞而導致基因重組的現(xiàn)象。大腸桿菌的接合配對是由致育因子(F因子)的存在所決定的。

本實驗采用的供體菌是大腸桿菌野生型Hfr菌株，對鏈霉素呈敏感性(Strs)，受體菌為大腸桿菌營養(yǎng)缺陷型突變體(Thr- Leu- Thi-)，需要蘇氨酸，亮氨酸和硫胺素，對鏈霉素呈抗性(Strr)。短期接合配對以后，在含有鏈霉素和硫胺素的基本培養(yǎng)基上只能分離到蘇氨酸和亮氨酸的重組子(Thr+ Leu+Thi-)，硫胺素標記位于轉(zhuǎn)移染色體的末端，在短期配對過程中因配對中斷難以轉(zhuǎn)移到受體細胞，因此硫胺素是Thr+ Leu+Thi-重組子的必須生長因子。

[教學內(nèi)容]

細菌的接合作用

實驗二十七

[目的要求]

學習噬菌體效價測定的基本方法。

[實驗原理]

噬菌體的效價就是一毫升培養(yǎng)液中所含活噬菌體的數(shù)量。效價測定的方法，一般應用雙層瓊脂平板法。由于在含有特異宿主細菌的瓊脂平板上，噬菌體產(chǎn)生肉眼可見的噬菌斑，因此，能進行噬菌體的計數(shù)。但因噬菌斑計數(shù)方法其實際效率難以接近100%(一般偏低，因為有少數(shù)活噬菌體可能未引起感染)，所以為了準確地表達病毒懸液的濃度(效價或滴度)一般不用病毒粒子的絕對數(shù)量而是用噬菌斑形成單位(Plague-forming units,簡寫成pfu)表示。

[教學內(nèi)容]

噬菌體效價的測定

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