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四,綜合題(第一題12分,2-4每題6分,共30分)
1. 在體外翻譯系統(tǒng)中,分析溶菌酶前體的合成.
A.分離到兩種不同的mRNA,一種mRNA是野生型的,能編碼整個溶菌酶前體分子,包括信號肽,分子量位17.8kd;另一種從突變體中分離而得,缺少編碼信號肽的大部分序列,無信號肽的分子量為15.6kd,在體外的翻譯系統(tǒng)中,分別加入這兩種RNA分子,適當?shù)木彌_液,氨基酸.其中,包括[35S]甲硫氨酸以標記蛋白質,最后,SRP和SRP受體以及微粒體的加入,如表中所列,混合物培養(yǎng)一定時間后,終止反應,免疫沉淀溶菌酶前體,經電泳和放射免疫,分析沉淀物.所獲得的蛋白質分子量如下表.試解釋結果
mRNA種類 SRP SRP受體 微粒體 蛋白質(KD) 編號
野生型 - + - 17.8 1
+ - - 8.0 2
+ + - 17.1 3
+ + + 15.6 4
突變型 - - - 15.6 1
+ - - 15.6 2
+ + - 15.6 3
+ + + 15.6 4
B.為了進一步研究體外條件下,SRP和微粒體存在時,翻譯產物的合成,每一種mRNA分子分別與這兩種組分共培養(yǎng)一定時間后,加入蛋白酶,在進行免疫賀電泳分析,在這種條件下,只有野生型mRNA能產生15.6kd的蛋白質.而突變體mRNA不能合成蛋白質,為什么?
2. 已知DNA的序列為:
W: 5'-AGCTGGTCAATGAACTGGCGTTAACGTTAAACGTTTCCCAG-3'
C: 3'-TCGACCAGTTACTTGACCGCAATTGCAATTTGCAAAGGGTC-5'
---------------------------------------->
上鏈和下鏈分別用W和C表示,箭頭表明DNA復制時,復制叉移動方向.試問:
A. 哪條鏈是合成后滯鏈的模板?
B. 試管中存在單鏈W,要合成新的C鏈,需要加入哪些成分?
C. 如果需要合成的C鏈中要被32P標記,核苷酸重的哪一個磷酸基團應帶有32P?
D. 如果箭頭表明DNA的轉錄方向,哪一條鏈是RNA的合成模板?
3. 由脫羧驅動,脂肪酸合成中脫羧作用的意義何在?舉出另一代謝途徑中的重要反應,它也具有上述機制.
4. 有效的"電子穴"(electron
sinks).有兩種重要的具維生素組分的輔酶.它們在酶促反應中都具穩(wěn)定碳陰離子中間物的作用.請講出這兩種輔酶和對應的維生素的名稱,及它們參與催化的主要反應.
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