2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)三基考試輔導(dǎo)：免疫細(xì)胞的分離

（1)外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離

　　外周血中單個(gè)核細(xì)胞（淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞)的比重與紅細(xì)胞、多核白細(xì)胞及血小板不同，介于1.075～1.090之間，因而可利用一種比重介于1.075～1.092之間而近于等滲的溶液作密度梯度離心，使一定比重的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布而加以分離。常用的分層液有Ficoll與Percoll兩種。

（2)淋巴細(xì)胞的分離

　　1)純淋巴細(xì)胞群的采集：利用單核細(xì)胞在37℃和Ca2+存在時(shí)，能主動(dòng)粘附在玻璃、塑料、尼龍毛、棉花纖維或葡聚糖凝膠的特性，從單個(gè)核細(xì)胞懸液中除去單核細(xì)胞醫(yī),學(xué).全,在.線(xiàn)gydjdsj.org.cn，從而獲得純淋巴細(xì)胞群。主要的方法有：①粘附貼壁法；②吸附柱過(guò)濾法；③磁鐵吸引法。

　　2)淋巴細(xì)胞亞群的分離原則：選擇純化所需細(xì)胞的方法是陽(yáng)性選擇法，而選擇性去除不要的細(xì)胞，僅留下所需的細(xì)胞為陰性選擇法。常用的方法包括：①E花環(huán)沉降法；②尼龍毛柱分離法；③親和板結(jié)合分離法；④磁性微球分離法及熒光激活細(xì)胞分離儀分離法。

（3)淋巴細(xì)胞的保存與活力測(cè)定

　　①短期保存技術(shù)：短期保存可置于4℃保存。

　　②長(zhǎng)期保存技術(shù)：液氮深低溫（-196℃)環(huán)境保存細(xì)胞，加入二甲亞砜作為保護(hù)劑。

　　③活力測(cè)定：最簡(jiǎn)便常用的為臺(tái)盼藍(lán)染色法，呈藍(lán)色。