| 公開(公告)號 | CN1141389C |
| 公開(公告)日 | 2004.03.10 |
| 申請(專利)號 | CN00112673.3 |
| 申請日期 | 2000.02.03 |
| 專利名稱 | 一種重組葡激酶的生產(chǎn)方法 |
| 主分類號 | C12N9/70 |
| 分類號 | C12N9/70;C12N1/21;C12N15/58;A61K38/50 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 成都金鵬生物技術(shù)有限公司;中國科學(xué)院上海植物生理研究所 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 王家馴;王世鵬;佟彬 |
| 地址 | 610041 四川省成都市高新區(qū)神仙路西路6號5-1-10 |
| 頒證日 | 2004.03.10 |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 上海新天專利代理有限公司 |
| 代理人 | 呂振萱 |
| 國省代碼 | 四川;51 |
| 主權(quán)項 | 一種重組葡激酶的生產(chǎn)方法，包括如下步驟：(1)將含有葡激酶基因的工程菌菌體經(jīng)冰凍，解凍，冰凍反復(fù)循環(huán)至少兩次；(2)在步驟(1)得到的經(jīng)過循環(huán)后的菌體中加入凍融液；(3)將步驟(2)得到的混合液離心，提取上清液；(4)將步驟(3)得到的上清液經(jīng)兩步柱層析純化，得到葡激酶原液；(5)將步驟(4)得到的葡激酶原液，加入保護劑，凍干后得到重組葡激酶產(chǎn)品；所述的冰凍溫度為-70℃；所述的凍融液為磷酸鹽緩沖液；所述離心提取上清液時，高速離心機的轉(zhuǎn)速為4000-5000rpm；所述上清液在兩步純化過程中采用SP.sepharose FF和Phenyl Sepharose FF柱層析；所述含有葡激酶基因的工程菌EcoliH15保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保藏號為CGMCC NO.0432。 |
| 摘要 | 一種重組葡激酶的生產(chǎn)方法，屬于生物醫(yī)學(xué)基因工程技術(shù)領(lǐng)域，其特征是將已構(gòu)建好的葡激酶基因工程菌菌體經(jīng)冰凍-解凍-冰凍反復(fù)循環(huán)數(shù)次，加入凍融液，將凍融液離心提取上清液，經(jīng)兩步柱層析純化，上樣經(jīng)洗脫、收集、超濾脫鹽、濃縮，除菌過濾得到葡激酶原液、凍干后得到本發(fā)明產(chǎn)品。該方法大大降低生產(chǎn)過程中葡激酶表達(dá)量的損失，延長分離介質(zhì)使用壽命。設(shè)備成本低，能保持細(xì)胞完整，生產(chǎn)過程簡單、方便、穩(wěn)定。 |
| 國際公布 |
