| 公開(公告)號 | CN1482243A |
| 公開(公告)日 | 2004.03.17 |
| 申請(專利)號 | CN02139604.3 |
| 申請日期 | 2002.09.13 |
| 專利名稱 | 鼻咽癌相關(guān)基因NGX6表達(dá)產(chǎn)物的獲取及抗體的制備 |
| 主分類號 | C12N15/12 |
| 分類號 | C12N15/12;C12N15/70;C12N15/62;C12Q1/68;C07K14/435;A61K39/395 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中南大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 李桂源;李江;張秋紅;譚琛 |
| 地址 | 410083湖南省長沙市麓山南路 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 中南大學(xué)專利中心 |
| 代理人 | 龔燦凡 |
| 國省代碼 | 湖南;43 |
| 主權(quán)項 | 一種鼻咽癌相關(guān)基因NGX6表達(dá)產(chǎn)物的獲取，采用多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)方法克隆NGX6基因蛋白編碼序列，構(gòu)建該基因的融合表達(dá)質(zhì)粒，導(dǎo)入JM109的大腸桿菌中，IPTG誘導(dǎo)其在大腸桿菌中的表達(dá)，SDS-PAGE電泳，Western blot鑒定，用GST融合蛋白純化試劑盒純化融合蛋白，本發(fā)明據(jù)原核表達(dá)載體pEGX-3X的GST閱讀框架設(shè)計引物，使NGX6基因的編碼區(qū)閱讀框與GST的閱讀框架一致；其特征在于：以含NGX6基因的質(zhì)粒為模板(0.1μg)，加入上述引物各10pmol進(jìn)行擴(kuò)增，回收PCR產(chǎn)物條帶；用SmalI酶切PCR回收產(chǎn)物及pEGX-3X載體，產(chǎn)生匹配的粘末端；小膠回收試劑回收線性的4.9kb的載體，NGX6編碼區(qū)片段；將pEGX-3X載體與NGX6基因連接，構(gòu)建成符合閱讀框的GST-NGX6融合基因；用含融合基因的pEGX-3X質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109，小量制備質(zhì)粒DNA，SalI和NotI酶切鑒定是否含插入片段，含插入片段的陽性克隆質(zhì)粒DNA純化后用DNA自動測序儀測序。 |
| 摘要 | 一種鼻咽癌相關(guān)基因NGX6表達(dá)產(chǎn)物的獲取及抗體的制備。本發(fā)明采用多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)方法克隆NGX6基因蛋白編碼序列，構(gòu)建該基因的融合表達(dá)質(zhì)粒，導(dǎo)入JM109的大腸桿菌中，IPTG誘導(dǎo)其在大腸桿菌中的表達(dá)，SDS-PAGE電泳，Western blot鑒定，用GST融合蛋白純化試劑盒純化融合蛋白，本發(fā)明據(jù)原核表達(dá)載體pEGX-3X的GST閱讀框架設(shè)計引物，使NGX6基因的編碼區(qū)閱讀框與GST的閱讀框架一致。NGX6是鼻咽癌發(fā)生和發(fā)展的重要的相關(guān)基因之一；它的表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)作用于鼻咽癌細(xì)胞，具有基因治療意義；抗體可用于鼻咽癌診斷。 |
| 國際公布 |
