| 公開(公告)號 | CN1171640C |
| 公開(公告)日 | 2004.10.20 |
| 申請(專利)號 | CN02114462.1 |
| 申請日期 | 2002.03.08 |
| 專利名稱 | 肝癌超抗原免疫基因治療劑的制備方法 |
| 主分類號 | A61K48/00 |
| 分類號 | A61K48/00 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學 |
| 發(fā)明(設計)人 | 隋延仿 |
| 地址 | 710032 陜西省西安市長樂西路17號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 西安通大專利代理有限責任公司 |
| 代理人 | 陳翠蘭 |
| 國省代碼 | 陜西;61 |
| 主權(quán)項 | 肝癌超抗原免疫基因治療劑的制備方法，其特征在于：從甲胎蛋白AFP高分泌的肝癌細胞中分離細胞基因組總DNA，設計特異性引物，通過PCR方法擴增AFP啟動子和順式增強子序列；分別從腸葡萄球菌場毒素A標準菌株FRI100基因組中通過PCR擴增SEA基因全序列和蛋白編碼序列，定點突變SEA基因位點，同時從人B細胞通過反轉(zhuǎn)錄PCR分別擴增共刺激分子B7.1基因編碼胞外區(qū)序列B7.1exc和跨膜區(qū)序列B7.1tm；將上述片段克隆至Clontech公司生產(chǎn)的逆轉(zhuǎn)錄病毒真核表達載體pLXSN中，分別構(gòu)建以AFP啟動子和增強子為調(diào)控元件的B7.1exc-SEA-B7.1tm和SEA-B7.1tm目的基因逆轉(zhuǎn)錄真核表達載體；將目的基因逆轉(zhuǎn)錄病毒載體在病毒包裝細胞系PA317、φ2中進行包裝；以包裝好的缺陷病毒顆粒感染人肝癌細胞，表達出SEA-B7.1融合蛋白；以視黃素、地塞米松、雌激素等藥物對SEA-B7.1的表達進行調(diào)控，同時通過檢測AFP水平來判斷治療效果；利用AFP特異性調(diào)控序列調(diào)控目的基因B7.1exc-SEA-B7.1tm和SEA-B7.1tm的表達，通過設計特異性引物：5’CGCAACTTAGGGACAAGT 3’TGTTATTGGCAGTGG和5’GCTGGCTTCACAGACTTATG 3’GGAGACCAGTTAGG AAGT，通過PCR方法擴增AFP啟動子和順式增強子序列，其序列如下：AFP啟動子序列GCAACTTAGGGACAAGTCATCTCTTTGAATATTCTGTAGTTTGAGGAGAATATTTGTTATATTTGCAAAATAAAATAAGTTTGCAAGTTTTTTTTTTCTGCCCCAAAGAGCTCTGTGTCCTTGAACATAAAATACAAATAACCGCTATGCTGTTAATTATTGGCAAATGTCCCATTTTCAACCTAAGGAAATACCATAAAGTAACAGATATACCAACAAAAGGTTACTAGTTAACAGGCATTGCCTGAAAAGAGTATAAAAGAATTTCAGCATGATTTTCCATATTGTGCTTCCACCACTGCCAATAACAAFP增強子序列GCTGGCTTCACAGACTTATGAAAAAGTAAACGGAATCAGAATTACATCAATGCAAAAGCATTGCTGTGAACTCTGTACTTAGGACTAAACTTTGAGCAATAACACATATAGATTGAGGATTGTTTGCTGTTAGTATACAAACTCTGGTTCAAAGCTCCTCTTTATTGCTTGTCTTGGAAAATTTGCTGTTCTTCATGGTTTCTCTTTTCACTGCTATCTATTTTTCTCAACCACTCACATGGCTACAATAACTGTCTGCAAGCTTATGATTCCCAAATATCTATCTCTAGCCTCAATCTTGTTCCAGAAGATAAAAAGTAGTATTCAAATGCACATCAACGTCTCCACTTGGAGGGCTTAAAGACGTTTCAACATACAAACCGGGGAGTTTTGCCTGGAATGTTTCCTAAAATGTGTCCTGTAGCACATAGGGTCCTCTTGTTCCTTAAAATCTAATTACTTTTAGCCCAGTGCTCATCCCACCTATGGGGAGATGAGAGTGAAAAGGGAGCCTGATTAATAATTACACTAAGTCAATAGGCATAGAGCCAGGACTGTTTGGGTAAACTGGTCACTTTATCTTAAACTAAATATATCCAAAACTGAACATGTACTTAGTTACTAAGTCTTTGACTTTATCTCATTCATACCACTCAGCTTTATCCAGGCCACTTATTTGACAGTATTATTGCGAAAACTTCCTAACTGGTCTCC，其特點是將所獲得的調(diào)控序列置于目的基因上游，特異性調(diào)控目的基因的表達。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種涉及基因工程技術(shù)的肝細胞癌(肝癌)超抗原免疫基因治療劑的制備方法，制備肝癌特異性啟動子和增強子調(diào)控序列介導的超抗原分子和共刺激分子在肝癌細胞進行靶向表達的治療劑，特異性增強肝癌細胞的免疫原性和與免疫效應細胞的識別作用。將此治療劑通過介入方式送到癌區(qū)，可有效殺傷肝癌細胞，治療時可利用相關(guān)藥物調(diào)控肝癌特異性啟動子和增強子的活性來調(diào)節(jié)超抗原分子和共刺激分子的表達，并通過肝癌特異性啟動子和增強子調(diào)控的自身產(chǎn)物水平判斷治療效果。同時利用肝癌特異性抗原、超抗原分子和共刺激分子在體外誘導自身T淋巴細胞進行過繼免疫治療，輔助癌區(qū)免疫治療，以增強療效、治療轉(zhuǎn)移病灶和預防復發(fā)。本發(fā)明的肝癌細胞超抗原免疫基因治療劑具有以下特點：(1)安全性；(2)靶向性；(3)可控性；(4)滅癌高效性，是一種很有前景的肝癌免疫基因治療劑。 |
| 國際公布 |
