| 公開(公告)號 | CN1624147A |
| 公開(公告)日 | 2005.06.08 |
| 申請(專利)號 | CN200310118223.X |
| 申請日期 | 2003.12.05 |
| 專利名稱 | 一種有效提高基因定點(diǎn)轉(zhuǎn)換（突變/修復(fù))的新方法 |
| 主分類號 | C12N15/90 |
| 分類號 | C12N15/90;C12N15/09;C12N15/82;C12N5/06;C12N5/10 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所;香港大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 劉德培;吳雪松;辛立;殷文璇;黃建東;謝賞恩;梁植權(quán) |
| 地址 | 100005北京市東單三條5號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 |
| 代理人 | 程偉 |
| 國省代碼 | 北京;11 |
| 主權(quán)項 | 一種提高細(xì)胞內(nèi)基因定點(diǎn)轉(zhuǎn)換的方法，包括：針對靶位點(diǎn)設(shè)計合成轉(zhuǎn)換用寡核苷酸分子；將寡核苷酸分子與轉(zhuǎn)染試劑混合，形成轉(zhuǎn)染復(fù)合物；使生長期細(xì)胞與有效抑制DNA合成濃度的抑制劑接觸，使染色體DNA的復(fù)制叉處于阻滯狀態(tài)；將轉(zhuǎn)染復(fù)合物與所述的染色體DNA的復(fù)制叉被阻滯的細(xì)胞共孵育；進(jìn)入細(xì)胞的單鏈寡核苷酸通過同源互補(bǔ)與靶序列相互作用，完成靶位點(diǎn)的定點(diǎn)轉(zhuǎn)換。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種細(xì)胞內(nèi)基因操作技術(shù)，利用DNA合成阻滯劑——胸苷(thymidine)可以將傳統(tǒng)單鏈寡核苷酸介導(dǎo)的基因定點(diǎn)轉(zhuǎn)換(修復(fù)/突變)的效率顯著提高。目前應(yīng)用本發(fā)明所獲得的最佳結(jié)果是將效率提高到原先傳統(tǒng)方法的約10倍水平。本發(fā)明通過胸苷降低復(fù)制叉移動速度，使靶基因在復(fù)制叉部位長時間以單鏈形式存在，為單鏈寡核苷酸與靶序列發(fā)生互補(bǔ)配對進(jìn)而完成靶位點(diǎn)的轉(zhuǎn)換(修復(fù)/突變)人為地創(chuàng)造了條件。本發(fā)明所獲得的結(jié)果可以有效提高基因定點(diǎn)轉(zhuǎn)換技術(shù)在各個領(lǐng)域的應(yīng)用性，包括動植物遺傳育種、病毒微生物的功能轉(zhuǎn)化，人類點(diǎn)突變遺傳病的基因治療，以及在功能基因組學(xué)研究中對單核苷酸多態(tài)性的研究方法等。本發(fā)明同時提供了一種構(gòu)建基因定點(diǎn)轉(zhuǎn)換研究的報告系統(tǒng)的方法，以及由此方法獲得的一株細(xì)胞系，該系統(tǒng)在檢測、評估基因定點(diǎn)轉(zhuǎn)換效果方面具有優(yōu)越性。 |
| 國際公布 |
