| 公開(公告)號 | CN1206349C |
| 公開(公告)日 | 2005.06.15 |
| 申請(專利)號 | CN02150920.4 |
| 申請日期 | 2002.11.28 |
| 專利名稱 | 海藻中提取鐵超氧化物歧化酶的方法 |
| 主分類號 | C12N9/08 |
| 分類號 | C12N9/08;C07K1/14;C07K1/36 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 浙江大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 龔興國;曾冬云;周遠(yuǎn) |
| 地址 | 310027 浙江省杭州市西湖區(qū)玉古路20號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 |
| 代理人 | 韓介梅 |
| 國省代碼 | 浙江;33 |
| 主權(quán)項 | 海藻中提取含鐵超氧化物歧化酶的方法，其特征是包括以下步驟：1)取新鮮海藻以1∶2～3的重量體積比加入pH值7～8、濃度為50～100mmol/L、含0.5mmol/LEDTA的磷酸緩沖液，將混和液進(jìn)行超聲破碎，破碎液離心，取上清；2)將上清在50℃～55℃水浴中不斷攪拌，進(jìn)行熱變性處理，去雜蛋白；3)離心步驟2)所得上清液，加入(NH4)2SO4至飽和濃度40～50％，靜置6小時以上，再離心、取上清，在上清液中加(NH4)2SO4至飽和濃度85％，靜置6小時以上，離心、取沉淀；4)取步驟3)所得沉淀，用pH值7～8，濃度為10mmol/L，含0.5mmol/LEDTA的磷酸緩沖液溶解，上SephadexG-25脫鹽柱，用自動收集器收集酶活性部分；5)將步驟4)收集的酶活性部分上陰離子DEAE-SepharoseFastFlow交換層析柱，用pH7.0～8.0，濃度為10mmol/L含0.5mmol/LEDTA的磷酸緩沖溶液作梯度洗脫，鹽梯度為0～0.8mol/LNaCl，收集酶活性部分；6)將步驟5)收集的酶活性部分經(jīng)透析后上陽離子CM-SepharoseFastFlow交換層析柱，用pH值5.0～5.8，濃度為2.5mmol/L、含0.5mmol/LEDTA的醋酸緩沖溶液作梯度洗脫，鹽梯度為0～0.8mol/LNaCl，流速控制在12ml/min，再收集酶活性部分；7)將步驟6)收集的活性部分上分子篩SephadexG-100/SephadexG75柱，用pH值7～8，濃度為10mmol/L含0.5mmol/LEDTA的磷酸緩沖液洗脫，收集活性峰，活性峰用雙蒸水透析，透析完全得樣品溶液，用聚乙二醇20000濃縮，凍干，即得含鐵超氧化物歧化酶。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了從海藻中提取鐵超氧化物歧化酶(Fe-SOD)的方法。由于該方法是從天然材料中提取鐵超氧化物歧化酶，海藻原料充足，不存在緊缺現(xiàn)象，同時材料成本相對于提取產(chǎn)品來說也是十分低廉。得到的產(chǎn)品比活相當(dāng)高，活力損失相對較小，可以滿足一般的醫(yī)藥需求，并且符合當(dāng)代人“崇尚自然，回歸自然”的心理需求，不存在轉(zhuǎn)基因生產(chǎn)導(dǎo)致的基因污染問題。工藝中采用了DEAE-Sepharose Fast Flow和CM-Sepharose Fast Flow兩種層析材料，其特點是流速快、可大量分離樣品，同時可反復(fù)再生利用，能實現(xiàn)大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。 |
| 國際公布 |
