| 公開(公告)號 | CN1219071C |
| 公開(公告)日 | 2005.09.14 |
| 申請(專利)號 | CN03129701.3 |
| 申請日期 | 2003.05.12 |
| 專利名稱 | 兩步發(fā)酵法生產(chǎn)酵母胞外海藻糖的方法 |
| 主分類號 | C12P19/12 |
| 分類號 | C12P19/12;//(C12P19/12,C12R1:85) |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 天津科技大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 肖冬光;趙華;王蘭;李于;;郭波 |
| 地址 | 300222 天津市河西區(qū)大沽南路1038號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 天津市三利專利商標(biāo)代理有限公司 |
| 代理人 | 劉莎莉 |
| 國省代碼 | 天津;12 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種兩步發(fā)酵法生產(chǎn)酵母胞外海藻糖的方法，通常它包括：菌體培養(yǎng)、海藻糖的合成、海藻糖的提取、分離、純化、濃縮、結(jié)晶、干燥，其特征在于：采用兩步發(fā)酵法利用酵母細(xì)胞中的海藻糖合成酶系合成胞外海藻糖，同時(shí)鈍化酵母的海藻糖分解酶活性，并用混合床離子交換系統(tǒng)分離純化海藻糖，其具體方法如下：(1)應(yīng)激態(tài)酵母細(xì)胞培養(yǎng)：同時(shí)采用氮饑餓、熱休克和滲透脅迫三種方法，誘導(dǎo)酵母細(xì)胞產(chǎn)生較多的應(yīng)激酶——海藻糖合成酶系，脅迫生長型酵母細(xì)胞向應(yīng)激態(tài)酵母細(xì)胞的轉(zhuǎn)變；(2)胞外海藻糖的合成：首先采用物理或化學(xué)的方法，其中物理方法為加熱處理法，化學(xué)的方法為甲苯處理法，對應(yīng)激態(tài)酵母細(xì)胞進(jìn)行休克處理；然后采用海藻糖合成培養(yǎng)基進(jìn)行胞外海藻糖的合成；搖瓶試驗(yàn)為500mL三角瓶，裝液量60～120mL，轉(zhuǎn)速100～180r/min；發(fā)酵罐試驗(yàn)采用5L自控罐以流加葡萄糖的方式進(jìn)行胞外海藻糖合成，其生產(chǎn)工藝是：初始裝液量2.5L，初始糖濃度為1～2％，pH4.0～7.0，溶氧10％～40％，合成溫度40～48℃；反應(yīng)過程中用10％Na2CO3調(diào)節(jié)pH，并可根據(jù)消耗的糖量補(bǔ)加葡萄糖液，最終反應(yīng)液量為3L，上述的加熱處理法是：在35～43℃振蕩培養(yǎng)1h后，升溫至45～65℃處理1h，甲苯處理法是：按每克酵母泥加入2～10％甲苯5mL，30～40℃處理1h；(3)海藻糖的分離與純化：將反應(yīng)液離心除酵母細(xì)胞，取上清液高溫滅菌，用截留分子量為10000的中空纖維超濾裝置過濾除大分子物質(zhì)；隨后采用混合床離子交換柱分離海藻糖和葡萄糖。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種以葡萄糖為基質(zhì)兩步發(fā)酵法生產(chǎn)酵母胞外海藻糖的方法，第一步為應(yīng)激態(tài)酵母細(xì)胞的培養(yǎng)，采用現(xiàn)有技術(shù)的氮饑餓、熱休克、滲透脅迫等方法，誘導(dǎo)酵母細(xì)胞產(chǎn)生較多的應(yīng)激酶——海藻糖合成酶系；第二步為應(yīng)激代謝產(chǎn)物海藻糖的合成，采用物理或化學(xué)的方法對應(yīng)激態(tài)酵母細(xì)胞進(jìn)行休克處理，打破酵母細(xì)胞膜對海藻糖滲透性的限制，利用酵母細(xì)胞中的海藻糖合成酶系大量合成胞外海藻糖。該方法產(chǎn)量高、生產(chǎn)工藝簡單、設(shè)備投資少、生產(chǎn)成本低，其產(chǎn)品海藻糖對生物大分子具有良好的非特異性保護(hù)作用，可廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、醫(yī)藥生物制品、食品及化妝品等領(lǐng)域。 |
| 國際公布 |
