公開(公告)號
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CN1673370A
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公開(公告)日
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2005.09.28
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申請(專利)號
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CN200510038300.X
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申請日期
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2005.01.28
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專利名稱
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暫態(tài)表達(dá)重組蛋白雞輸卵管生物反應(yīng)器的制造方法
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主分類號
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C12N15/12
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分類號
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C12N15/12;C12N15/10;C12N15/85;C12N15/87;C12N15/66
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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揚州大學(xué)
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發(fā)明(設(shè)計)人
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孫懷昌
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地址
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225009江蘇省揚州市大學(xué)南路88號
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頒證日
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國際申請
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機構(gòu)
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揚州市錦江專利事務(wù)所
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代理人
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江平
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國省代碼
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江蘇;32
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主權(quán)項
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暫態(tài)表達(dá)重組蛋白雞輸卵管生物反應(yīng)器的制造方法,包括以下步驟:a、分子克隆雞卵清蛋白基因調(diào)控序列:根據(jù)已發(fā)表的雞卵清蛋白基因序列(GenBank登錄號GI:212504)設(shè)計引物,以中國狼山雞基因組DNA為模板,用高保真多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)克隆長度分別為3.0kb的5′和3′雞卵清蛋白基因調(diào)控序列;b、構(gòu)建雞輸卵管特異表達(dá)載體:對pHC粘粒載體修飾獲得pHC20載體;對pcDNA3.0真核表達(dá)載體修飾獲得pcDNA2.2載體;將雞卵清蛋白基因的5′和3′調(diào)控序列同時克隆入pHC20載體,獲得pOV1雞輸卵管特異表達(dá)載體;將雞卵清蛋白基因的5′和3′調(diào)控序列同時克隆入pcDNA2.2載體,獲得pOV2雞輸卵管特異表達(dá)載體;將雞卵清蛋白基因的5′調(diào)控序列克隆入pcDNA2.2載體,獲得pOV3雞輸卵管特異表達(dá)載體;c、將含人組織激肽釋放酶基因(GenBank登錄號為GI:22027643)的三種雞輸卵管特異表達(dá)重組載體與選定的雞體內(nèi)基因轉(zhuǎn)染劑25kDa聚乙烯亞胺(PEI)混合,比例為1微克DNA∶2微升PEI,分別經(jīng)翅靜脈注射產(chǎn)蛋雞,注射劑總量為2~3毫克重組載體,分一次或兩次注射。
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摘要
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暫態(tài)表達(dá)重組蛋白雞輸卵管生物反應(yīng)器的制造方法,屬于基因工程和生物制藥領(lǐng)域。本發(fā)明的技術(shù)方案包括雞卵清蛋白基因調(diào)控序列的分子克隆、雞輸卵管高效表達(dá)載體的構(gòu)建及優(yōu)化、基因轉(zhuǎn)染劑的選擇、重組載體注射方法、劑量和次數(shù)的選擇。與現(xiàn)有的同類技術(shù)相比,該發(fā)明不僅具有非手術(shù)、經(jīng)濟(jì)、實用等優(yōu)點,而且目的基因的表達(dá)水平高、表達(dá)維持時間長、表達(dá)產(chǎn)物的活性完全。表達(dá)在蛋清中的重組蛋白既可以純化后作為防治人、畜疾病的藥物,也可以不經(jīng)純化直接作為人類的保健品或動物的飼料添加劑進(jìn)行開發(fā)。
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國際公布
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