| 公開(公告)號 | CN1712070A |
| 公開(公告)日 | 2005.12.28 |
| 申請(專利)號 | CN200410023347.4 |
| 申請日期 | 2004.06.25 |
| 專利名稱 | 一種基因載體的制備方法及應(yīng)用 |
| 主分類號 | A61K48/00 |
| 分類號 | A61K48/00 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中南大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 周科朝;朱曬紅;黃蘇萍;李志友 |
| 地址 | 410083湖南省長沙市左家垅 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 中南大學(xué)專利中心 |
| 代理人 | 袁 翔 |
| 國省代碼 | 湖南;43 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種基因載體的制備方法，其特征在于：(1)羥基磷灰石納米顆粒制備：將分析純Ca(NO3)2和(NH4)H2PO4分別溶于去離子水中，配成1mol/L的溶液，將Ca(NO3)2和(NH4)H2PO4溶液以體積比5∶3的比例在1500轉(zhuǎn)/min的轉(zhuǎn)速下混合，并用NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH值在11～12范圍，攪拌10小時(shí)后，老化24小時(shí)；再將得到的沉淀物放入高壓釜中，在200℃、200mv、200轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下處理4小時(shí)，再經(jīng)清洗、過濾、干燥得到羥基磷灰石納米顆粒；(2)羥基磷灰石納米顆�；鞈乙褐苽浼凹毙远拘栽囼�(yàn)：取羥基磷灰石納米顆粒0.5g，放入離心管，加去離子水20ml，用超聲波分散制備羥基磷灰石混懸液，并加入分散劑，使混懸液充分分散和穩(wěn)定。用濃度梯度分別為4.5mg/ml、5mg/ml、0.5mg/ml的羥基磷灰石納米顆�；鞈乙何察o脈注射小白鼠，連續(xù)兩周觀察動物的死亡及毒性反應(yīng)；(3)羥基磷灰石納米顆粒生物相容性實(shí)驗(yàn)：將SGC-7901細(xì)胞接種于96孔組織培養(yǎng)板；加入不同濃度的納米顆粒混懸液，繼續(xù)培養(yǎng)48h后進(jìn)行MTT測定。比色法確定有活力的細(xì)胞數(shù)，方差分析方法采用SPSS9.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行。(4)羥基磷灰石納米顆粒與DNA結(jié)合實(shí)驗(yàn)：取瓊脂糖粉制凝膠羥基磷灰石納米顆�；鞈乙合♂尲覲EGFP-N1混均10min(VORTEX2GENIE，USA)，靜置30min，離心；以PEGFP-N11μg為對照，取上清液瓊脂糖凝膠電泳檢測。羥基磷灰石納米顆�；鞈乙翰⑵湔{(diào)至不同的pH值，將其分別放入eppendorf管與PEGFP-N1混合，混均，室溫靜置30min，離心；取上清液瓊脂糖凝膠電泳檢測；(5)納米顆粒-DNA復(fù)合體體外轉(zhuǎn)染細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：將SGC-7901細(xì)胞按接種于培養(yǎng)皿加入配有小牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)24h后，在培養(yǎng)皿加入納米顆粒DNA復(fù)合體；以單純PEGFP-N1表達(dá)質(zhì)粒DNA以及與脂質(zhì)體結(jié)合的PEGFP-N1表達(dá)質(zhì)粒DNA作為對照�；旌吓囵B(yǎng)分別于24，48，72h后熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域用的材料，尤其是一種基因載體材料的制備方法，其特征在于：將Ca(NO3)2和(NH4)H2PO4溶液以體積比5∶3的比例在1500轉(zhuǎn)/min的轉(zhuǎn)速下混合，再將得到的沉淀物放入高壓釜中，在200℃、200mv、200轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下處理4小時(shí)，得到羥基磷灰石納米顆粒；它的結(jié)構(gòu)與骨和牙齒相似，是具有良好生物相容性的生物陶瓷材料，可根據(jù)應(yīng)用的要求制備成所需要的幾何形態(tài)，具有大的表面能，增強(qiáng)其攜帶DNA的能力，解決了基因載體轉(zhuǎn)導(dǎo)率低、藥物易從脂質(zhì)體中滲漏和難制備等問題，保證了在使用過程中的分散穩(wěn)定性，滿足了基因治病的有效性和安全性。 |
| 國際公布 |
