| 公開(公告)號 | CN1238497C |
| 公開(公告)日 | 2006.01.25 |
| 申請(專利)號 | CN200410023498.X |
| 申請日期 | 2004.02.25 |
| 專利名稱 | 利用三環(huán)葵烷-9-基-二硫代碳酸酯鉀鹽誘導血管內(nèi)皮細胞向神經(jīng)元分化的方法 |
| 主分類號 | C12N5/08(2006.01)I |
| 分類號 | C12N5/08(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 山東大學 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 苗俊英;張尚立;王 楠 |
| 地址 | 250100山東省濟南市歷下區(qū)山大南路27號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 濟南三達專利事務所 |
| 代理人 | 孫 君 |
| 國省代碼 | 山東;37 |
| 主權(quán)項 | 一種利用D609誘導血管內(nèi)皮細胞向神經(jīng)元分化的方法，由以下步驟組成：1)選取處于對數(shù)生長期的血管內(nèi)皮細胞，接種于培養(yǎng)板各孔中的鋪有明膠的蓋玻片上，置于飽和濕度、5％的CO2、37℃培養(yǎng)箱內(nèi)，在含有10％小牛血清和40μg/LbFGF的M199培養(yǎng)液中培養(yǎng)，至細胞生長達到蓋玻片面積的80％～90％；2)用無血清培養(yǎng)液將上述培養(yǎng)板各孔中的細胞清洗1～2次，然后對培養(yǎng)板各孔中的細胞進行分組，確定對照組和誘導實驗組，每組不少于4孔；3)對照組的血管內(nèi)皮細胞培養(yǎng)液采用去除血清和和bFGF的M199培養(yǎng)基，誘導實驗組的細胞培養(yǎng)液除使用對照組培養(yǎng)液外還添加了濃度為5mg/L～30mg/L的D609；4)分別調(diào)整上述對照組和誘導實驗組血管內(nèi)皮細胞的pH值，使pH為7.2，置于飽和濕度、5％的CO2、37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)20～30分鐘；5)將步驟4)中對照組和誘導實驗組血管內(nèi)皮細胞pH調(diào)為7.4-7.8，置于飽和濕度、5％的CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)，誘導6～11小時，檢測誘導結(jié)果。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種利用D609誘導血管內(nèi)皮細胞向神經(jīng)元分化的方法，該方法由血管內(nèi)皮細胞接種培養(yǎng)；無血清培養(yǎng)液清洗；對照組和誘導實驗組血管內(nèi)皮細胞在pH為7.2條件下預誘導；在濃度為5mg/L～30mg/L的D609，pH7.4-7.8，飽和濕度、5％的CO2，37℃條件下誘導以及維持誘導等步驟組成。本發(fā)明方法證明了血管內(nèi)皮細胞也具有多分化的潛能性，這為細胞的定向誘導分化提供了新的理論和實驗依據(jù)，也為利用D609使其作為誘導劑誘導細胞分化開辟了新用途。 |
| 國際公布 |
