| 公開(公告)號 | CN1249232C |
| 公開(公告)日 | 2006.04.05 |
| 申請(專利)號 | CN03115732.7 |
| 申請日期 | 2003.03.11 |
| 專利名稱 | 日本血吸蟲（中國大陸株)MFS4基因的克隆、表達(dá)和DNA疫苗 |
| 主分類號 | C12N15/30(2006.01)I |
| 分類號 | C12N15/30(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12N15/79(2006.01)I;A61K39/002(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海家畜寄生蟲病研究所;上海動(dòng)物生物技術(shù)研究中心;農(nóng)業(yè)部動(dòng)物寄生蟲學(xué)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 林矯矯;傅志強(qiáng);張 亮;苑純秀;劉金明;馮新港;蔡幼民 |
| 地址 | 200232上海市石龍路345弄3號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 上海新天專利代理有限公司 |
| 代理人 | 王 巍 |
| 國省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種編碼日本血吸蟲MFS4基因的核苷酸序列，其特征在于它具有如下的核苷酸序列及相應(yīng)的氨基酸序列：gtatcatatcgttaacgcgctccagttttgtttttgcccaggtattataatggcggtt58MetAlaVal1ggtggtcagaaaaaggtcactaaaggggggaagaaaggaggcaaaaag106GlyGlyGlnLysLysValThrLysGlyGlyLysLysGlyGlyLysLys51015aaaacggctgatccattctctaaaaaggagtggtatgatatcaaggct154LysThrAlaAspProPheSerLysLysGluTrpTyrAspIleLysAla20253035ccagctatgtttcctaaaaggacatgtgcaagaacgcttgtcacacga202ProAlaMetPheProLysArgThrCysAlaArgThrLeuValThrArg404550actcagggtactcgcatagccagtgaagcacttaagggtcgtgttgtt250ThrGlnGlyThrArgIleAlaSerGluAlaLeuLysGlyArgValVal556065acacttagtcttggggatctgagcgaaaagaacgaagaagtcttccgt298ThrLeuSerLeuGlyAspLeuSerGluLysAsnGluGluValPheArg707580aaattcaagcttcaaatcgaagatgtccaggggcgtcattgtctaaca346LysPheLysLeuGlnIleGluAspValGlnGlyArgHisCysLeuThr859095aatttccacggattagaacttactcgagacaaactatgttcagttgtt394AsnPheHisGlyLeuGluLeuThrArgAspLysLeuCysSerValVal100105110115gttaagtggcggtcaactatagaagcgcacgtcgacgtcaaaacaaca442ValLysTrpArgSerThrIleGluAlaHisValAspValLysThrThr120125130gatggatacttacttcgtttctttattatcacgttcactccaagtgta490AspGlyTyrLeuLeuArgPhePheIleIleThrPheThrProSerVal135140145ccacggtctgaaaggctccactcttatgctcagaccacacgcataaaa538ProArgSerGluArgLeuHisSerTyrAlaGlnThrThrArgIleLys150155160cggattcgcgctcgccttgttgagataatccagcaagaggtttctact586ArgIleArgAlaArgLeuValGluIleIleGlnGlnGluValSerThr165170175tgcgatctgaaagaggtcgttaataagcttattccagattccattgca634CysAspLeuLysGluValValAsnLysLeuIleProAspSerIleAla180185190195caagacgctcgaaaagcggcatcatggatatatccactaggtgagaca682GlnAspAlaArgLysAlaAlaSerTrpIleTyrProLeuGlyGluThr200205210tttatccgcaaagttaaggttttaaaaagaccaaaagctgatctcgct730PheIleArgLysValLysValLeuLysArgProLysAlaAspLeuAla215220225cggctcatggaacttcatggtgaatcaaagtcaactgcccctggtgag778ArgLeuMetGluLeuHisGlyGluSerLysSerThrAlaProGlyGlu230235240actgtatcccgtccagatcactatgaacctccgaaagttgattcagtg826ThrValSerArgProAspHisTyrGluProProLysValAspSerVal245250255taattcaataaagaatttcatccggaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa871。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及生物基因領(lǐng)域，具體涉及日本血吸蟲(中國大陸株)MFS4基因的基因序列、免疫篩選、在大腸桿菌中的表達(dá)、DNA疫苗的構(gòu)建及小鼠免疫保護(hù)試驗(yàn)。本發(fā)明基于我們對東方田鼠抗日本血吸蟲病機(jī)理研究的發(fā)現(xiàn)，用健康東方田鼠血清IgG3抗體免疫篩選日本血吸蟲成蟲cDNA文庫，獲得一個(gè)陽性克隆，用RACE技術(shù)擴(kuò)增出含ORF的基因。同源性序列分析表明其為一個(gè)新基因(MFS4)，開放閱讀框含780bp，編碼259個(gè)氨基酸。將MFS4基因亞克隆至原核表達(dá)質(zhì)粒pET28a(+)中，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET28a/MFS4，在BL21(DE3)表達(dá)菌中獲得高效表達(dá)，融合蛋白分子量約35kD，具有良好的抗原性；將該基因亞克隆至真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3中，構(gòu)建成重組質(zhì)粒pcDNA3/MFS4，制備DNA疫苗免疫昆明系小鼠，獲得28.6％的減蟲率、21.73％的減卵率。 |
| 國際公布 |
