| 公開(kāi)(公告)號(hào) | CN1264977C |
| 公開(kāi)(公告)日 | 2006.07.19 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN02117823.2 |
| 申請(qǐng)日期 | 2002.05.22 |
| 專利名稱 | 一種蚯蚓DNA酶及其提取方法 |
| 主分類號(hào) | C12N9/22(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12N9/22(2006.01)I;C07K1/18(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 上�？藖錾锕こ逃邢薰� |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 牛 勃;楊利軍;楊 琦;向 前;閆占清;胡曉年;劉曉玲;楊 濤;常冰梅 |
| 地址 | 201203上海浦東張江高科碧波路328號(hào)B座110室 |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 北京華科聯(lián)合專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 楊 厚;王 為 |
| 國(guó)省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種蚯蚓DNA酶及其提取方法，其特征包括蚯蚓除毒、細(xì)胞破碎、鹽析、脫鹽、凝膠過(guò)濾、層析步驟，具體步驟如下：A、蚯蚓除毒，是先將蚯蚓洗盡，浸泡兩日，至其體內(nèi)泥土完全排出，身體呈潔凈半透明狀，再用20v電脈沖刺激排除蚯蚓體內(nèi)多種有害微生物及其毒素，及時(shí)更換鹽溶液浸泡3至4次，直至無(wú)肉眼可見(jiàn)黃色毒液分泌為止；B、細(xì)胞破碎，是將上述無(wú)毒蚯蚓用超聲細(xì)胞破碎器進(jìn)行勻漿，再用高速冷凍離心機(jī)離心，將過(guò)夜抽提液在pH5.4環(huán)境下，4℃，12000轉(zhuǎn)離心20分鐘，可見(jiàn)試管中淡黃色澄清透明的上清液和管底褐色混濁的沉淀物；C、鹽析，是采用硫酸氨分段進(jìn)行：鹽析溫度4℃、pH5.4、時(shí)間18小時(shí)；棄40％飽和度時(shí)的沉淀和70％飽和度時(shí)的上清液，收集70％飽和度時(shí)沉淀蛋白，即有DNA酶活性部分；D、脫鹽、凝膠過(guò)濾，層析，其中層析采用DEAE陰離子交換層析，洗脫條件是：20mMTris鹽酸，pH8.0，0-0.1MNacl，24ml/小時(shí)洗脫速度；收集0-0.1M/LNacl范圍的活性峰洗脫液，即可得到一種層析純或電泳純DNA酶，分子量為45000±300道爾頓的蛋白。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種高效穩(wěn)定的蚯蚓DNA酶及其提取方法，此酶可將環(huán)狀的質(zhì)粒DNA、鏈狀的嗜菌體DNA、鮭精DNA、小牛血清DNA降解成小核苷酸片段，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，最適溫度在41℃左右，耐高溫，90℃三小時(shí)活性無(wú)明顯改變，最適pH值為5.4左右，Mn，Mg，Ba等大部分重金屬離子對(duì)其有較強(qiáng)的激活作用，提取該酶的方法包括蚯蚓除毒、細(xì)胞破碎、鹽析、脫鹽、層析、凝膠過(guò)濾等六步驟，此酶生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單，產(chǎn)量高，成本低，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，易保存運(yùn)輸，該提取方法提取DNA酶量大，純度高，實(shí)驗(yàn)設(shè)備要求簡(jiǎn)單，具有廣泛的應(yīng)用前景。 |
| 國(guó)際公布 |
