| 公開(公告)號 | CN1268761C |
| 公開(公告)日 | 2006.08.09 |
| 申請(專利)號 | CN02136716.7 |
| 申請日期 | 2002.08.29 |
| 專利名稱 | 一種制備人載脂蛋白基因重組蛋白的方法 |
| 主分類號 | C12P21/02(2006.01)I |
| 分類號 | C12P21/02(2006.01)I;C12N15/09(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 上海凱曼生物科技有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 周鳴南;龔邦強 |
| 地址 | 200233上海市田林路219號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 上海開祺知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 |
| 代理人 | 費開逵 |
| 國省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項 | 一種人載脂蛋白ApoAIMilano的制備方法，其特征在于1-采用RT-PCR技術(shù)從人肝細(xì)胞中獲得人載脂蛋白基因片段；1-2、通過PCR直接位點突變的方法制得人載脂蛋白基因；1-3、采用PCR方法制備上述的兩段基因片段β-B，A-II亞克隆到pMD-T載體上，進(jìn)行DNA序列測定，然后從pMD-T載體上切下，克隆到含有Tac啟動子，LacI抑制蛋白基因、t0轉(zhuǎn)錄終止子和Ampr青霉素抗性篩選基因、coLEI復(fù)制序列的表達(dá)載體pMZG上，再用SphI，HindIII限制性內(nèi)切酶消化后，按β-B(500bp)A-II(250bp)SphI＿SalISalI＿HindIIIpMZG(3400bp)SphI＿HindIII進(jìn)行拼裝連接，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pMZG-3，將此構(gòu)建的表達(dá)人載脂蛋白重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進(jìn)入宿主菌大腸桿菌內(nèi)，組建成工程菌；1-4、表達(dá)工程菌發(fā)酵、發(fā)酵液處理、純化，得人載脂蛋白；1-5、純化的人載脂蛋白用谷胱甘肽、還原型谷胱甘肽處理，形成人載脂蛋白的二聚體肽。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種人載脂蛋白ApoAIMilano二聚體肽的制備方法，它采用基因重組技術(shù)將人的ApoAIMilano基因克隆到表達(dá)載體上，構(gòu)建成表達(dá)重組質(zhì)粒，并轉(zhuǎn)化進(jìn)入大腸桿菌，組建成表達(dá)工程菌，經(jīng)發(fā)酵、純化工藝獲得人ApoAIMilano蛋白，它可用于治療急性動脈粥樣硬化斑塊形成而導(dǎo)致的心絞痛、心肌梗死等冠狀動脈綜合癥。 |
| 國際公布 |
