| 公開(kāi)(公告)號(hào) | CN1294258C |
| 公開(kāi)(公告)日 | 2007.01.10 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200410005199.3 |
| 申請(qǐng)日期 | 2004.02.10 |
| 專利名稱 | 一種分離抗菌肽的方法與分離的抗菌肽 |
| 主分類號(hào) | C12N15/00(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12N15/00(2006.01)I;C07K5/00(2006.01)I;C07K14/00(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | 2004.1.16 CN 200410015163.3 |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 劉秋云;赫 然 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 劉秋云;赫 然 |
| 地址 | 510275廣東省廣州市新港西路中山大學(xué)生物工程研究中心 |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 廣州知友專利商標(biāo)代理有限公司 |
| 代理人 | 宣國(guó)華 |
| 國(guó)省代碼 | 廣東;44 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種分離抗菌肽的方法，其特征在于包括如下步驟：(1)高保真PCR構(gòu)建酵母α交配因子前導(dǎo)肽與隨機(jī)肽的融合DNA片段，用于隨機(jī)肽的分泌表達(dá)；(2)插入用EcoR I和Xba I雙酶切的含有誘導(dǎo)型啟動(dòng)子的釀酒酵母載體；(3)為避免未連接的線狀DNA在轉(zhuǎn)化后與酵母基因組DNA發(fā)生重組，用核酸外切酶III和綠豆芽核酸酶對(duì)其進(jìn)行消化處理，純化后電激轉(zhuǎn)化釀酒酵母；(4)轉(zhuǎn)化子轉(zhuǎn)接至棉子糖/半乳糖誘導(dǎo)表達(dá)平板，過(guò)夜生長(zhǎng)后用含大腸桿菌菌種K12D31的上層培養(yǎng)基覆蓋，觀測(cè)抑菌圈；或用液體培養(yǎng)基誘導(dǎo)表達(dá)后測(cè)抑菌率；(5)對(duì)陽(yáng)性克隆進(jìn)行PCR擴(kuò)增，測(cè)序；(6)利用多肽自動(dòng)合成儀合成抗菌肽，利用瓊脂糖擴(kuò)散法驗(yàn)證抗菌活性。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開(kāi)了一個(gè)分離抗菌肽的方法與抗菌肽，構(gòu)建酵母α交配因子前導(dǎo)肽與隨機(jī)肽的融合DNA片段，插入含有誘導(dǎo)型啟動(dòng)子的釀酒酵母載體，用核酸外切酶III和綠豆芽核酸酶消化未連接的線狀DNA，純化后電激轉(zhuǎn)化釀酒酵母，轉(zhuǎn)化子過(guò)夜生長(zhǎng)后用含大腸桿菌菌種K12D31的上層培養(yǎng)基覆蓋，觀測(cè)抑菌圈。用液體培養(yǎng)基誘導(dǎo)表達(dá)后測(cè)抑菌率。對(duì)陽(yáng)性克隆進(jìn)行PCR擴(kuò)增，測(cè)序。本發(fā)明方法能簡(jiǎn)單、高效地發(fā)現(xiàn)抗菌寡肽和多肽；這將為抗生素的發(fā)現(xiàn)開(kāi)辟新途徑。 |
| 國(guó)際公布 |
