| 公開(公告)號 | CN1300314C |
| 公開(公告)日 | 2007.02.14 |
| 申請(專利)號 | CN200510038300.X |
| 申請日期 | 2005.01.28 |
| 專利名稱 | 暫態(tài)表達(dá)重組蛋白雞輸卵管生物反應(yīng)器的制造方法 |
| 主分類號 | C12N15/12(2006.01)I |
| 分類號 | C12N15/12(2006.01)I;C12N15/10(2006.01)I;C12N15/85(2006.01)I;C12N15/87(2006.01)I;C12N15/66(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 揚(yáng)州大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 孫懷昌 |
| 地址 | 225009江蘇省揚(yáng)州市大學(xué)南路88號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 揚(yáng)州市錦江專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 江 平 |
| 國省代碼 | 江蘇;32 |
| 主權(quán)項 | 暫態(tài)表達(dá)重組蛋白雞輸卵管生物反應(yīng)器的制造方法，包括以下步驟：a、分子克隆雞卵清蛋白基因調(diào)控序列：根據(jù)已發(fā)表的GenBank登錄號GI：212504雞卵清蛋白基因序列設(shè)計引物，以中國狼山雞基因組DNA為模板，用高保真多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCR克隆長度分別為3.0kb的5′和3′雞卵清蛋白基因調(diào)控序列；b、構(gòu)建雞輸卵管特異表達(dá)載體：對pHC粘粒載體修飾獲得pHC20載體；對pcDNA3.0真核表達(dá)載體修飾獲得pcDNA2.2載體；將雞卵清蛋白基因的5′和3′調(diào)控序列同時克隆入pHC20載體，獲得pOV1雞輸卵管特異表達(dá)載體；將雞卵清蛋白基因的5′和3′調(diào)控序列同時克隆入pcDNA2.2載體，獲得pOV2雞輸卵管特異表達(dá)載體；將雞卵清蛋白基因的5′調(diào)控序列克隆入pcDNA2.2載體，獲得pOV3雞輸卵管特異表達(dá)載體；所述對pHC粘粒載體的修飾包括在其Sal I和Not I限制酶切位點之間增加Xcm I、Eco RI、Pst I、Sma I、BamHI、Spe I、Xba I、Eag I酶切位點；對pcDNA3.0真核表達(dá)載體修飾為去掉其中的SV40病毒序列和新霉素neo抗性基因，c、將含人組織激肽釋放酶基因GenBank登錄號為GI：22027643的三種雞輸卵管特異表達(dá)重組載體與選定的雞體內(nèi)基因轉(zhuǎn)染劑25kDa聚乙烯亞胺PEI混合，比例為1微克DNA∶2微升PEI，分別經(jīng)翅靜脈注射產(chǎn)蛋雞，注射劑總量為2～3毫克重組載體，分一次或兩次注射。 |
| 摘要 | 暫態(tài)表達(dá)重組蛋白雞輸卵管生物反應(yīng)器的制造方法，屬于基因工程和生物制藥領(lǐng)域。本發(fā)明的技術(shù)方案包括雞卵清蛋白基因調(diào)控序列的分子克隆、雞輸卵管高效表達(dá)載體的構(gòu)建及優(yōu)化、基因轉(zhuǎn)染劑的選擇、重組載體注射方法、劑量和次數(shù)的選擇。與現(xiàn)有的同類技術(shù)相比，該發(fā)明不僅具有非手術(shù)、經(jīng)濟(jì)、實用等優(yōu)點，而且目的基因的表達(dá)水平高、表達(dá)維持時間長、表達(dá)產(chǎn)物的活性完全。表達(dá)在蛋清中的重組蛋白既可以純化后作為防治人、畜疾病的藥物，也可以不經(jīng)純化直接作為人類的保健品或動物的飼料添加劑進(jìn)行開發(fā)。 |
| 國際公布 |
