| 公開(公告)號 | CN1884527A |
| 公開(公告)日 | 2006.12.27 |
| 申請(專利)號 | CN200610012821.2 |
| 申請日期 | 2006.06.09 |
| 專利名稱 | 利用內源性血管生成抑制因子Arresten基因制備蛋白的方法 |
| 主分類號 | C12N15/12(2006.01)I |
| 分類號 | C12N15/12(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I;C07K14/435(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | |
| 申請(專利權)人 | 鄭金平;唐海英 |
| 發(fā)明(設計)人 | 鄭金平;唐海英;陳顯久;解 軍 |
| 地址 | 030001山西省太原市新建南路56號山西醫(yī)科大學衛(wèi)生毒理學教研室 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構 | 山西太原科衛(wèi)專利事務所 |
| 代理人 | 朱 源 |
| 國省代碼 | 山西;14 |
| 主權項 | 一種利用內源性血管生成抑制因子Arresten基因制備蛋白的方法，步驟包括，從人體中提取總RNA，加入上、下游引物，RT-PCR反轉錄擴增得到Arresten基因的DNA，再取質粒載體雙酶切后與RT-PCR擴增產(chǎn)物Arresten DNA雙酶切后連接，得到連接反應產(chǎn)物，最后將產(chǎn)物轉化入到宿主大腸桿菌中表達，得到Arresten蛋白，其特征在于：連接及表達載體所用質粒為pBV220，載體pBV220與目的ArrestenDNA的摩爾數(shù)比：1∶1～1∶3，在15～18℃連接，時間8～10小時，得到連接反應產(chǎn)物pBV220-Arr。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種基因重組、表達技術，具體為一種利用內源性血管生成抑制因子Arresten基因制備蛋白的方法。解決了現(xiàn)有技術中存在的利用人體中的Arresten基因制備具有抑制腫瘤血管生成的蛋白質過程中存在的效率低下的問題。步驟包括，從人體中提取總RNA，加入上、下游引物， RT-PCR反轉錄擴增得到Arresten基因的DNA，再取質粒載體pBV220雙酶切后與RT-PCR擴增產(chǎn)物Arresten DNA雙酶切后連接，得到連接反應產(chǎn)物pBV220-Arr，最后將產(chǎn)物轉化入到宿主大腸桿菌中表達，得到Arresten蛋白。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明使用一種同時作為連接載體和表達載體的質粒pBV220，既簡單又經(jīng)濟，節(jié)省了成本，而且表達效果非常好，提高了合成的效率。為所需目的蛋白的合成提供了一種新途徑。 |
| 國際公布 |
