公開(公告)號
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CN1286980C
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公開(公告)日
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2006.11.29
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申請(專利)號
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CN200410061236.2
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申請日期
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2004.11.30
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專利名稱
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表達(dá)人類反義受磷蛋白基因的重組腺相關(guān)病毒及其制備方法
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主分類號
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C12N15/861(2006.01)I
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分類號
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C12N15/861(2006.01)I;A61K48/00(2006.01)I;C12N15/66(2006.01)I;C12N7/01(2006.01)I;A61P9/04(2006.01)I
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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汪道文;肖 嘯;趙春霞;汪培華
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地址
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430030湖北省武漢市解放大道1095號轉(zhuǎn)同濟(jì)醫(yī)院內(nèi)科汪道文
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頒證日
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國際申請
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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武漢開元專利代理有限責(zé)任公司
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代理人
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王和平
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國省代碼
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湖北;42
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主權(quán)項(xiàng)
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一種表達(dá)人類反義受磷蛋白基因的重組腺相關(guān)病毒,該重組腺相關(guān)病毒由天然狀態(tài)的腺相關(guān)病毒和腺病毒經(jīng)分子生物學(xué)方法人工剪切、修飾和加工而成,該載體系統(tǒng)包括包裝質(zhì)粒pXX2,輔助質(zhì)粒pXX6,真核表達(dá)載體pXXUF1,并在真核表達(dá)載體pXXUF1內(nèi)反向插入了人類受磷蛋白基因編碼序列,其步驟: 1)包裝質(zhì)粒pXX2:它含有編碼腺相關(guān)病毒Rep蛋白和Cap蛋白的 編碼序列,并在上游和下游各插入一個p5啟動子; 2)輔助質(zhì)粒pXX6:其刪除了腺病毒的致病基因序列,保留了腺病 毒E1A、E2A和VA1RNA基因; 3)真核表達(dá)載體pXXUF1:所用的是CMV啟動子,其含有Not 1 多克隆位點(diǎn),可以連接不同的目的基因,pXXUF1反向連接人受 磷蛋白基因,該載體含有rAAV轉(zhuǎn)基因表達(dá)所必須的末端ITRs 重復(fù)序列。
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摘要
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本發(fā)明涉及一種表達(dá)人類反義受磷蛋白基因的重組腺相關(guān)病毒及其制備方法,屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域,用于心力衰竭及其他相關(guān)疾病的基因治療。該重組腺相關(guān)病毒由天然狀態(tài)的腺相關(guān)病毒和腺病毒經(jīng)分子生物學(xué)方法人工剪切、修飾和加工而成,該載體系統(tǒng)包括包裝質(zhì)粒pXX2,輔助質(zhì)粒pXX6,真核表達(dá)載體pXXUF1和pXXUF3,并在真核表達(dá)載體pXXUF1內(nèi)反向插入了人類受磷蛋白基因編碼序列。本發(fā)明的表達(dá)人類反義受磷蛋白基因的重組腺相關(guān)病毒制備方法成功,所制備的重組腺相關(guān)病毒滴度高,能驅(qū)動目的基因長期有效的表達(dá),可以用于心梗及其他相關(guān)性疾病所致心力衰竭的治療。
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國際公布
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