方法名稱(chēng)： |
九分散－馬錢(qián)子成分的鑒定－凝膠電泳法 |
應(yīng)用范圍： |
本方法采用凝膠電泳法定性檢測(cè)九分散中的馬錢(qián)子。 |
方法原理： |
通過(guò)電泳分析，含馬錢(qián)子的中成藥九分散經(jīng)脫脂處理后,顯示出與馬錢(qián)子相吻合的5條主譜帶,充分說(shuō)明九分散中主要含有馬錢(qián)子。 |
試劑： |
1. 甲叉雙丙烯酰胺（含量不低于98.5%) 2. 丙烯酰胺（含量不低于98.5%) 3. 三羥甲基氨基甲烷（含量不低于99.8%) 4. 甘氨酸（分析純) 5. 過(guò)硫酸銨（分析純) 6. 考馬斯亮蘭（進(jìn)口分裝) |
儀器設(shè)備： |
電泳儀 |
試樣制備： |
1 樣品的制備 1.1單味藥材:稱(chēng)取標(biāo)準(zhǔn)的中藥材馬錢(qián)子1G,加入Tris—HCl緩沖液5mL,研磨勻漿,離心20分鐘,上清液置冰箱中備用。 1.2中成藥:九分散由馬錢(qián)子、麻黃、乳香、沒(méi)藥四味藥組成,其中乳香、沒(méi)藥均為樹(shù)脂類(lèi)藥材,用乙醚多次溶解,脫去大部分樹(shù)脂,殘?jiān)鼡]盡乙醚后,同上法勻漿離心后備用。 2試劑的配制 2.1分離膠緩沖液(pH8.9):取36.6 gTris、48.0mL 1N HCl調(diào)pH8.9、加水至100mL。 2.2分離膠貯液:取28ｇ丙烯酰胺(ACR),0.74gBis加水至100mL,過(guò)濾后使用。 2.3過(guò)硫酸銨溶液:0.56g過(guò)硫酸銨溶于100mL H2O中。 2.4濃縮膠緩沖液(pH6.7):5.98gTris、48.0mL 1N HCl調(diào)pH6.7,加水至100mL。 2.5濃縮膠貯液:10gACR,2.5gBis加水至100 mL,過(guò)濾后使用。 2.6核黃素溶液:4mg核黃素加水至100mL。 2.740%蔗糖溶液:40g蔗糖,加水至100mL。 2.8電極緩沖液:先配成貯液,6 gTris,28.8g甘氨酸,用水溶成100mL (pH8.3),用前再稀釋10倍。 |
操作步驟： |
1. 電泳 分別取上述各種樣品的上清液各20μl,用微量注射器點(diǎn)樣于濃縮膠的樣品模子中,加入電極緩沖液,向上槽緩沖液中加入1～2滴溴酚蘭指示劑示蹤,電泳開(kāi)始后,電流控制在10mA,樣品進(jìn)入分離膠后加大到30mA,待指示劑行至末端1cm時(shí),即可停止電泳,約需2～3小時(shí)。 2.染色、脫色 取出膠板后,放入0.2%考馬斯亮蘭(R250)染色液中,在36℃染色1小時(shí),再用20%甲醇和7%HAC的脫色液在36℃進(jìn)行脫色,直至背景清晰為止，得到電泳圖譜。 |
參考文獻(xiàn)： |
王應(yīng)斌，穆仙麗，宿永成等. 中成藥九分散的PAGE分析. 內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2002，06：34 |
