方法名稱： |
注射用雙黃連（凍干)—黃芩甙和綠原酸的測(cè)定—高效液相色譜法 |
應(yīng)用范圍： |
本方法采用高效液相色譜法測(cè)定注射用雙黃連（凍干)中黃芩甙和綠原酸的含量。 本方法適用于中藥制劑注射用雙黃連（凍干)。 |
方法原理： |
供試品于容量瓶中，加30%甲醇溶液超聲溶解定容，過(guò)濾，濾液進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)324nm處檢測(cè)黃芩甙和綠原酸的吸收值，計(jì)算出其含量。 |
試劑： |
1. 甲醇（色譜純) 2. 乙酸 3. 三乙胺 |
儀器設(shè)備： |
1. 儀器 1.1 高效液相色譜儀 1.2 色譜柱 Alltech C18色譜柱（250×4.6mm，5μm)。 1.3 紫外吸收檢測(cè)器 2. 色譜條件 2.1 流動(dòng)相：A（5%冰乙酸甲醇溶液) B（0.5%三乙胺水溶液)梯度洗脫（0-35min，A:20-75%，B:80-25%)。 2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)：324nm 2.3 柱溫：室溫 |
試樣制備： |
1. 稱取供試品 精密稱取本品粉末（過(guò)五號(hào)篩-80目)試樣 50mg。 2 .對(duì)照品溶液的制備 精密稱取黃芩甙和綠原酸對(duì)照品2.56mg和1.06mg，置25mL量瓶中，用30%甲醇水溶液超聲溶解，定容，溶液中二者的濃度分別為0.0512mg/mL和0.0212mg/mL，作為對(duì)照品溶液。 3. 供試品溶液的制備 將供試品置于50mL容量瓶中，加30%甲醇溶液超聲溶解定容，過(guò)濾，取續(xù)濾液為供試品溶液。 注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一�！熬芰咳 毕抵噶咳◇w積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。 |
操作步驟： |
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 精密吸取上述對(duì)照品溶液2，4，6，8，10μL注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)324nm處測(cè)定黃芩甙和綠原酸的吸收值，以進(jìn)樣量對(duì)峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程。 2. 供試品的測(cè)定 精密吸取供試品溶液10μL注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)324nm處測(cè)定黃芩甙和綠原酸的吸收值，計(jì)算出其含量。 |
參考文獻(xiàn)： |
馬洪波，鄧光瑞，李興斌等. 改進(jìn)HPLC法測(cè)定雙黃連粉針中黃芩甙和綠原酸的含量. 中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，1999，（1)：59. |
