目前最常用的方法是金胺-酚改良抗酸染色法,該法是采用金胺-酚染色法和改良抗酸染色法復(fù)染,以提高檢出率和準(zhǔn)確性。單用金胺-酚染色法或改良抗酸染色法,其效果均不如復(fù)染方法。檢查時(shí),取患者腹瀉的新鮮糞便或經(jīng)10% 福爾馬林固定保存(4℃ 1個(gè)月內(nèi))糞便,自然沉淀后用吸管盡可能取底部糞便,于載玻片上涂成糞膜,晾干后先用金胺-酚染色,再用改良抗酸染色法復(fù)染。
(一)金胺-酚染色法
1.染液配制
lg/L金胺-酚染色液(第一液):金胺1g,石炭酸5.0g,蒸餾水100 ml ;3%鹽酸酒精(第二液):鹽酸3 ml,95%酒精100 ml ;高錳酸鉀液(第三液):高錳酸鉀0.5g,蒸餾水100 ml 。
2.染色步驟
滴加第一液于晾干的糞膜上,10~15 分鐘后水洗;滴加第二液,1分鐘后水洗;滴加第三液,1 分鐘后水洗;待干后置熒光顯微鏡下觀察。
低倍熒光顯微鏡下,可見卵囊為一圓形小亮點(diǎn),呈現(xiàn)乳白色熒光。高倍鏡下卵囊呈乳白或略帶綠色,卵囊壁為一薄層,多數(shù)卵囊周圍深染,中央淡染,似環(huán)狀;或深染結(jié)構(gòu)偏位,有些卵囊全部為深染;但有些標(biāo)本可出現(xiàn)非特異的熒光顆粒,應(yīng)注意鑒別。
(二)改良抗酸染色法(modifieD acid-fast stain)
1.染液配制
石炭酸復(fù)紅染色液(第一液): 堿性復(fù)紅4g,95% 酒精20 ml,石炭酸8 ml,蒸餾水100 ml ;10 %硫酸溶液(第二液):純硫酸10 ml,蒸餾水90 ml (邊攪拌邊將硫酸徐徐傾人水中);20g/L 孔雀綠液(第三液):20g/L 孔雀綠原液1 ml,蒸餾水10 ml 。
2.染色步驟
滴加第一液于糞膜上,1.5~10 分鐘后水洗; 滴加第二液,1~10 分鐘后水洗;滴加第三液,1 分鐘后水洗;待干后置顯微鏡下觀察。染色后,卵囊為玫瑰紅色,圓形或橢圓形,背景為綠色。染色(1.5分鐘) 和脫色(2分鐘)時(shí)間短,卵囊內(nèi)子孢子邊界不明顯;染色時(shí)間長(zhǎng)(5~10 分鐘),脫色時(shí)間相應(yīng)延長(zhǎng)時(shí),子孢子邊界明顯,卵囊和子孢子均被染成玫瑰紅色,子孢子呈月牙形,共4個(gè),其他非特異顆粒則染成藍(lán)黑色,容易與衛(wèi)生人才網(wǎng)卵囊區(qū)分。
不具備熒光顯微鏡的實(shí)驗(yàn)室,可染色后先在光鏡低、高倍鏡下過篩檢查,見有小紅點(diǎn)時(shí)再轉(zhuǎn)用油鏡觀察,這樣可提高檢出速度和準(zhǔn)確性。
(三)金胺-酚改良抗酸染色法
先用金胺-酚染色后,再用改良抗酸染色法復(fù)染,然后置光鏡下觀察。卵囊同改良抗酸染色法所見,但非特異性顆粒被染成藍(lán)黑色,兩者顏色顯然不同,極易區(qū)別,使檢出率和準(zhǔn)確性都明顯提高。