引 言
血細(xì)胞計(jì)數(shù)和白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)廣泛應(yīng)用于臨床實(shí)踐,適當(dāng)?shù)膮⒖紖^(qū)間值對(duì)理解病人的檢測(cè)結(jié)果是十分必要的。在以前的研究中用來(lái)建立相關(guān)參考值的分析儀被采用新的技術(shù)和能提供額外參考值的儀器所取代。新近介紹的血液分析儀包括能夠提供網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)數(shù)量和其成熟指數(shù)的模式。最近進(jìn)行的研究是使用新型五種自動(dòng)血液分析儀對(duì)一組西歐成年人進(jìn)行測(cè)試以確定相關(guān)的參考區(qū)間。
主題,材料和方法
主題和樣本
我們的研究議定書遵從NCCLS 和1FCC 的建議,研究方案完全符合醫(yī)學(xué)倫理制度法案. 所有的志愿者都是知情同意。志愿者通過(guò)在參與醫(yī)學(xué)全.在線gydjdsj.org.cn醫(yī)院、當(dāng)?shù)卮髮W(xué)和當(dāng)?shù)貓?bào)紙刊登廣告招募的。他們必須住在Antwerp (比利時(shí)安特衛(wèi)普省) ,如果志愿者在測(cè)試之前曾患病或吃藥就要被排除在外。傳染病是一項(xiàng)排除標(biāo)準(zhǔn),同時(shí)要注意獻(xiàn)血者的習(xí)慣。血液采集是在志愿者早晨臥床休息十五分鐘之后,使用Sarstedt 血液采集系統(tǒng)�？鼓齽┻x用EDTA 三鉀。樣本將立即送往實(shí)驗(yàn)室并在四個(gè)小時(shí)之內(nèi)進(jìn)行分析。
分析儀
全血標(biāo)本計(jì)數(shù),包括白細(xì)胞分類和網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù),全部使用新研發(fā)的五種血液分析儀: Pentra120 Retic (原法國(guó)蒙彼利埃的Abx 公司) ,Gen-S(美國(guó)邁阿密的Coulter 電子公司),SE 9500(日本神戶的Toa醫(yī)療電子企業(yè)) ,CELL-DYN4000 (美國(guó)圣克拉拉的Abbott診斷企業(yè)) 和Advia120 (美國(guó)休斯敦拜爾公司)。所有的分析儀都是根據(jù)制造商的指導(dǎo)進(jìn)行校準(zhǔn)和維護(hù)。不同的分析儀采用不同的標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn):MinocalTM用于校準(zhǔn)Pentra 120Retic,S-CAL 用于校準(zhǔn)Gen-S ,SCS-1000 用于校準(zhǔn)SE9500,Cell Dyn－HemCalTM用于校準(zhǔn)Cell Dyn4000,Advia SETpointTM用于校準(zhǔn)Advia120。不同的分析儀不適用于同一種測(cè)試結(jié)果。在整個(gè)研究過(guò)程中,商業(yè)化的三級(jí)控制每天都在所有分析儀上進(jìn)行測(cè)試。研究完全遵循分析儀的自我表現(xiàn)、評(píng)價(jià)和比較。遵循ICSH 標(biāo)準(zhǔn)化血液學(xué)的指導(dǎo)方針,所有的分析儀要進(jìn)行線性、重復(fù)性、結(jié)轉(zhuǎn)性的測(cè)試,并與常規(guī)實(shí)驗(yàn)分析儀STKS 的Coulter 進(jìn)行對(duì)照。根據(jù)目標(biāo)值中級(jí)控制和控制的每日平均結(jié)果的差異計(jì)算偏差值。誤差是通過(guò)重復(fù)測(cè)試同一個(gè)健康志愿者的樣本16 次來(lái)計(jì)算變異系數(shù)。直到每個(gè)樣本都按照標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行測(cè)試,不同的分析儀才能延遲測(cè)量時(shí)間。為避免時(shí)間延遲帶來(lái)的任何影響,所有的樣本都要按照嚴(yán)格的輪換秩序才能使每一臺(tái)分析器能收到一系列的第一樣本。
統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)
每臺(tái)分析儀的所有參數(shù)以Refval體系來(lái)計(jì)算非參數(shù)2.5～97.5參考區(qū)間分值。這個(gè)體系包括由IFCC 推薦的實(shí)用方法和公式。不同亞類(男性和女性)的參考區(qū)間根據(jù)NCCLS 的指導(dǎo)方針進(jìn)行分類。標(biāo)準(zhǔn)偏離正常檢驗(yàn)(Z值) 有衡量不同亞類差別性的意義。兩個(gè)亞類的標(biāo)準(zhǔn)偏差進(jìn)行對(duì)比,如果較大標(biāo)準(zhǔn)偏差超出較小偏差的1. 5倍,那么分別計(jì)算兩個(gè)亞類的參考區(qū)間就不會(huì)考慮Z 值。在不同的分析儀的參考區(qū)間就沒(méi)有進(jìn)行統(tǒng)計(jì)比較了。
結(jié) 論
317名(142名男性和175名女性) 平均年齡在39歲(19歲～60歲)的健康個(gè)體參與了此項(xiàng)研究。47名志愿者有獻(xiàn)血的歷史(26名男性和21名女性)。Pentra 120 Retic,Gen-S,SE 9500,Cell Dyn 4000和Advia120分別分析了308,312,316,317和317個(gè)樣本。308 個(gè)樣本組成的小組在每個(gè)分析儀上都進(jìn)行了分析。所有分析儀的不精確性,線性,結(jié)轉(zhuǎn)性和可比性與制造商的規(guī)格要求是一致的。偏差和不精確性的結(jié)果在表一中顯示出來(lái),并與早期的研究相一致。通過(guò)計(jì)算得出的紅細(xì)胞和血小板參數(shù)的參考區(qū)間在表二中列舉出來(lái)。根據(jù)NCCLS的標(biāo)準(zhǔn),紅細(xì)胞計(jì)數(shù),血紅蛋白濃度和血細(xì)胞比容根據(jù)性別進(jìn)行界定。男性和女性的參考區(qū)間在表二中列舉出來(lái)。由于獻(xiàn)血者的習(xí)慣并沒(méi)有影響紅細(xì)胞參數(shù)的參考區(qū)間,因此獻(xiàn)血者并沒(méi)有被排除在外。為測(cè)定一些志愿者是否存在某種程度的鐵缺乏,我們將所有缺鐵的志愿者排除在外然后重新計(jì)算紅細(xì)胞計(jì)數(shù),血紅蛋白濃度和血細(xì)胞比容的參考區(qū)間。這些重新計(jì)算的區(qū)間與我們最初的計(jì)算區(qū)間相一致(數(shù)據(jù)未顯示
)。網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟分?jǐn)?shù)列于表三。將男性和女性按照絕對(duì)織計(jì)數(shù)進(jìn)行計(jì)算。白血細(xì)胞計(jì)數(shù)和白血球差的參考區(qū)間列于表四。與高級(jí)職稱考試網(wǎng)早期的報(bào)告相比,白血球差以絕對(duì)百分比的形式出現(xiàn)。
討 論
我們?cè)谖迮_(tái)新型自動(dòng)血液分析儀上對(duì)317個(gè)成年健康志愿者的血液樣本進(jìn)行檢測(cè),然后計(jì)算全血計(jì)數(shù)的參考區(qū)間,包括白細(xì)胞差和網(wǎng)織紅細(xì)胞。例如網(wǎng)織紅細(xì)胞的成熟形態(tài),諸如此類的由這些分析儀所提供的一些重要的新參數(shù)目前正在研究之中,在繼續(xù)驗(yàn)證過(guò)程中參考區(qū)間的計(jì)算是重要的第一步。遵循NCCLS的指導(dǎo)原則男性和女性獨(dú)立的參考區(qū)間必須按照紅細(xì)胞計(jì)數(shù). 血紅蛋白濃度,血細(xì)胞比容和絕對(duì)織計(jì)數(shù)進(jìn)行計(jì)算。對(duì)于其他參考區(qū)間的參數(shù)按照總?cè)藬?shù)計(jì)算。獻(xiàn)血者的習(xí)慣并不影響紅細(xì)胞計(jì)數(shù),血紅蛋白濃度和紅細(xì)胞(數(shù)據(jù)未顯示)。若干因素有助于區(qū)別在不同研究中的參考區(qū)間,這些包括參與研究志愿者的特征,在參考區(qū)間計(jì)算中使用的分析方法和方式。在我們最初對(duì)儀器進(jìn)行評(píng)價(jià)時(shí)所有的分析儀均具有良好的分析能力。所有的儀器都能做好日常質(zhì)量控制。誤差和非精確性在表一中列出。我們認(rèn)為從分析的角度來(lái)看沒(méi)有理由質(zhì)疑這些結(jié)果的有效性。我們計(jì)算的血紅細(xì)胞計(jì)數(shù),血紅蛋白濃度和紅細(xì)胞的參考區(qū)間很少與已經(jīng)被接受的結(jié)果相比較,但是卻與在研究中較少引用的更早的參考區(qū)間相似。由Kelly et al. Davis et al.研究的血紅細(xì)胞計(jì)數(shù),血紅蛋白濃度和紅細(xì)胞的參考區(qū)間的90%在我們計(jì)算的置信區(qū)間內(nèi),但是溫氏臨床血液學(xué)研究出的參考區(qū)間在我們的置信范圍之外并高于這個(gè)值(數(shù)據(jù)未顯示)。我們的平均細(xì)胞體積(MCV) 參考區(qū)間近似于最近的和較早的報(bào)告。我們將我們的參考區(qū)間與兩個(gè)小型研究相關(guān)聯(lián),這兩個(gè)小型研究有健康志愿者參與,樣本用Cell Dyn 4000 (n=74)和Advia120 (n=39)分析器進(jìn)行分析。來(lái)自于這兩個(gè)實(shí)驗(yàn)的紅細(xì)胞參數(shù)的參考區(qū)間與我們的結(jié)果相似(結(jié)果未顯示)。老年人,尤其是超過(guò)70歲的男性。血紅蛋白濃度,紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血細(xì)胞比容下降。我們的研究人口分布均衡. 高年齡組比例較高并沒(méi)有影響研究結(jié)果。在NCCLS 的指導(dǎo)下,所有的樣本采集都是臥床休息15分鐘后進(jìn)行,同時(shí)嚴(yán)格的使用止血帶。嚴(yán)格控制這些預(yù)先分析因素能夠解釋與其它研究相比我們紅細(xì)胞參考區(qū)間的降低原因。我們意識(shí)到這些理想的預(yù)分析條件在日常實(shí)踐中不常常遇見(jiàn)。我們計(jì)算的血小板參考區(qū)間與早期和最近公開(kāi)的報(bào)告相一致。女性的血小板計(jì)數(shù)高于男性但是差別很小沒(méi)有單獨(dú)界定的必要。由于腫脹血小板中存在抗凝劑,尤其是乙二胺,平均血小板體積(MPV)具有時(shí)間依賴變化性。由于樣本在各個(gè)分析儀之間采取嚴(yán)格的輪換制度,我們無(wú)法相信一個(gè)系統(tǒng)的時(shí)間滯后在SE 9500上能造成更高的MPV 參考區(qū)間。相反,自從孔阻抗或流式細(xì)胞儀方法使MPV 的差異高達(dá)40 % ,MPV 參考區(qū)間的差異便單純的依賴方法論了。在最近進(jìn)行的對(duì)流式細(xì)胞進(jìn)行的評(píng)估中Butarello et al.對(duì)五個(gè)相同的分析儀網(wǎng)織紅細(xì)胞參考區(qū)間進(jìn)行計(jì)算。雖然我們按照絕對(duì)網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)分別計(jì)算男性和女性的參考區(qū)間,我們發(fā)現(xiàn)了相似的網(wǎng)織紅細(xì)胞參考區(qū)間,除了使用Advia 120 時(shí)的參考上限。在上述研究中的Advia 120 的上限高于100×109/L ,而在我們的研究中這個(gè)值低于80×109/L。由d’Onofrio 和其團(tuán)隊(duì)研究的基于拜爾另一種產(chǎn)品-H-3血液分析儀的網(wǎng)織紅細(xì)胞參考上限低于Buttarello et al. 的研究結(jié)果。在這些研究中提出的在Advia 120上得出的不同網(wǎng)織紅細(xì)胞參考區(qū)間需要進(jìn)一步的驗(yàn)證。我們?cè)赟E 9500 ,Cell Dyn 4000和Advia 120分析儀上提出網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟指數(shù)的參考區(qū)間。在臨床應(yīng)用中不成熟的網(wǎng)織紅細(xì)胞分?jǐn)?shù)在不斷的增加。自從分析儀對(duì)界定這些成熟形態(tài)具有不同性和任意性,我們只是簡(jiǎn)單的提出這些結(jié)論,沒(méi)有進(jìn)一步的評(píng)論。我們的白血細(xì)胞參考區(qū)間低于標(biāo)準(zhǔn)報(bào)告。將白血細(xì)胞分化參考區(qū)間作為白血細(xì)胞鑒別的百分值與標(biāo)準(zhǔn)報(bào)告是一致的,但是與較低白血細(xì)胞計(jì)數(shù)一致的是絕對(duì)白血細(xì)胞分化計(jì)數(shù)參考區(qū)間也較低。我們的白細(xì)胞和白細(xì)胞分化的區(qū)間與
Davis et al. 和Bain et al. 的發(fā)現(xiàn)相似。在最近對(duì)不同種族女性進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)研究時(shí)Bain 提出對(duì)健康“粒”進(jìn)行不必要的研究之前將病人的結(jié)果與醫(yī)學(xué)全.在線gydjdsj.org.cn標(biāo)準(zhǔn)參考區(qū)間進(jìn)行對(duì)比的重要性�；谠贜HANES 期間收集的這些結(jié)論,Assendelft 指出白血細(xì)胞計(jì)數(shù)下降超過(guò)兩個(gè)獨(dú)立的調(diào)查,這個(gè)跡象十分明顯。雖然不同的研究發(fā)現(xiàn)性別不同白血細(xì)胞區(qū)間也不同,尤其是中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù),在我們研究中觀察的男性和女性白血細(xì)胞計(jì)數(shù)的差別,但我們的研究太小而不能計(jì)算單獨(dú)的亞類參考區(qū)間。除了白細(xì)胞分化之外,不同血液參數(shù)的參考區(qū)間與所有的分析儀是一致的。與其它分析儀相反的是,Advia 120 在白血細(xì)胞分化中具備額外的六單元集群。這組大型不染色細(xì)胞(LUC) 的集群可能帶有細(xì)胞,在其它分析儀的淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞集群中能夠發(fā)現(xiàn),導(dǎo)致了在Advia 120上較低的參考區(qū)間�；谶@個(gè)原因我們?cè)贏dvia 120上重新提出計(jì)算的大型不染色細(xì)胞的參考區(qū)間。在我們研究中使用的計(jì)算參考區(qū)間的統(tǒng)計(jì)方法是基于NCCLS 和IFCC 的指導(dǎo)。雖然在一些研究中使用參數(shù)化方法,但在大多研究中使用這種非參數(shù)方式。不同的統(tǒng)計(jì)方法可以使結(jié)果稍稍存在差異,但是不能完全解釋較低的紅血細(xì)胞參數(shù)和白血細(xì)胞參考區(qū)間。
我們提出五種血液檢測(cè)儀參考區(qū)間。研究的最重要發(fā)現(xiàn)是紅細(xì)胞參數(shù)和白血細(xì)胞的參考區(qū)間較低。雖然這些較低的參考區(qū)間在早期使用陳舊的技術(shù)時(shí)提出過(guò). 但是他們低于一般可接受的范圍。在對(duì)“貧血癥”進(jìn)行重要研究和”白血球減少癥”啟動(dòng)之前這些結(jié)論必須被考慮。
