1．常規(guī)檢查法－間接免疫熒光檢查方法
�。�1)取大白鼠的肝、腎、心、小白鼠胃，人甲狀腺，橫紋肌等單獨(dú)或制成復(fù)合冰凍切片（4～5μm，)。其中1片用56℃甲醇固定3min，另切一片不固定，分別放入濕盒中。
（2)將病人血清用0.01mol/l Ph7.2～7.4磷酸緩沖鹽水（PBS)作1：5稀釋，滴加覆蓋抗原切征，置濕盒中，37℃，30～60min。
�。�3)切片用PBS洗2次，每次5min。用電磁攪拌或振蕩幫助洗凈不參與反應(yīng)的血清蛋白。吹干。
�。�4)滴加抗人IgG或γ-球蛋白熒光抗體（用0.01%伊文氏藍(lán)稀釋)覆蓋切片，37℃中放置30min。
�。�5)用PBS洗2次，方法同步驟（3)，隨后，再用蒸餾水洗1min。
�。�6)緩沖甘油（pH9.0～9.5,PBS或碳酸鹽緩沖液1份和1份甘油混合)封片。
2．對(duì)照試驗(yàn)可作空白，替代，一步法抑制或吸收等對(duì)照，以證明陽(yáng)性結(jié)果的特異性。
3．熒光顯微鏡檢查陽(yáng)性熒光呈明亮的黃綠色熒光，抗原組織成分呈現(xiàn)出陽(yáng)性熒光時(shí)，即證明病人有對(duì)該組織成分的自身抗體，如細(xì)胞核呈明亮的黃綠色熒光即報(bào)告抗核抗體陽(yáng)性。對(duì)陽(yáng)性結(jié)果根據(jù)需要可進(jìn)一步作滴度檢查。醫(yī)學(xué) 全在.線提供
近來(lái)一些報(bào)告認(rèn)為用培養(yǎng)細(xì)胞作某些自身抗體檢查，可以取得良好的效果。
在檢查自身抗體中常�？沙霈F(xiàn)某種非特異性熒光，如粘液腺分泌物，粘液細(xì)胞，白細(xì)胞，胃粘膜表現(xiàn)的食物殘?jiān)募‘愂刃钥贵w反應(yīng)等，以及有時(shí)用大白鼠胃組織切片出現(xiàn)的壁細(xì)胞非特異熒光等，容易引起混淆。這些問(wèn)題都可通過(guò)對(duì)照試驗(yàn)（包括用正常人血清)和觀察者的經(jīng)驗(yàn)加以排除。
4．結(jié)果報(bào)告 根據(jù)熒光顯微鏡觀察的結(jié)果一是形態(tài)特征，二是熒光的亮度。在報(bào)告時(shí)先報(bào)告陽(yáng)性熒光的形態(tài)名稱加抗體如抗核抗體，再描述熒光亮度，主要靠觀察者的主觀目測(cè)，可分陰性和陽(yáng)性兩種結(jié)果，陽(yáng)性又可分“+”為可見(jiàn)較弱的熒光，“++”為明亮的熒光，“+++”為耀眼的熒光。雖然這樣的目測(cè)記錄精確度可能在不同觀察者之間有差別，但經(jīng)過(guò)訓(xùn)練和有較多的觀察經(jīng)驗(yàn)后，這種方法基本上是可靠的，也便于推廣應(yīng)用。
近年使用熒光顯微分光光度計(jì)和圖像分析儀等定量檢測(cè)方法，結(jié)果比較客觀，將結(jié)果打印報(bào)告更適合于臨床診斷和科學(xué)研究，應(yīng)爭(zhēng)取采用這些先進(jìn)儀器和方法，改進(jìn)結(jié)果的判斷，記錄和報(bào)告。
5．免疫酶組織化學(xué)檢測(cè)自身抗體方法免疫酶組織化學(xué)間接法可以代替免疫熒光法用于自身抗體的檢測(cè)，但尚未普遍采用。其優(yōu)點(diǎn)是可以用普通顯微鏡觀察結(jié)果，更適合于基層實(shí)驗(yàn)室使用，標(biāo)本也可長(zhǎng)期保存。
（1)抗原（與免疫熒光法相同)。
�。�2)操作方法：
�、倏乖衅扔�0.01mol/L pH7.4PBS洗1次，吹干，放入濕盒中。
�、诘渭�1：5稀釋的待檢血清，37℃，30min。
�、跴BS洗2次，每次5min，吹干。
�、艿渭舆m當(dāng)稀釋的酶標(biāo)記A蛋白或抗人IgG抗血清，37℃，30min。
�、萦�辣根過(guò)氧化物酶底物顯色（同前述免疫酶法)，室溫10min。
�、匏�。
�、�0.1%伊文氏藍(lán)或蘇木精染色5min。
�、嗨矗Ｒ�(guī)酒精脫水，透明封片。
結(jié)果：陽(yáng)性為棕色，陰性為藍(lán)色。在第3步之后可用1%H2O2作用15min消除內(nèi)源酶干擾。
