比色分析測量儀器和測量方法(比色分析,吸光光度法,比色測量儀器)

　　（二）比色測量儀器

　　1．光電比色計

　　光電比色計用光電池和檢流計測量透射光的強度并直接可讀出百分透光率T（%）或吸光度A。圖8-9是581-G型光電比色計的示意圖。它是利用濾光片把鎢燈產(chǎn)生的白光中與測定無關(guān)的光除去，使入射光盡可能是接近溶液補色的單色光，從而提高了比色分析的準確度。

圖8－9　 581-G型光電比色計光學(xué)線路示意圖

圖8-10　721型分光光度計光學(xué)系統(tǒng)示意圖１.光源�。�.,8.聚

光透鏡　３.棱鏡�。�.準直鏡5.,11.保護玻璃 6.入射狹縫 7.

平面鏡 9.吸收池10.光門 12.光電管 13.光柵

　　2．721型分光光度計

　　721型分光光度計的工作波長范圍為360-800nm。采用真空光電管作為光電能量轉(zhuǎn)換元件，在整個可見光區(qū)都比較靈敏。同時采用晶體管放大電路和電表直讀結(jié)構(gòu)，儀器的靈敏度和穩(wěn)定性都比較好。

　　圖8-10為721型分光光度計的光學(xué)系統(tǒng)示意圖。由光源發(fā)出的連續(xù)輻射于聚光鏡上，經(jīng)平面鏡轉(zhuǎn)角90度反射到入射狹縫，射入單色器。入射光經(jīng)過準直鏡反身射在出射狹縫上，再經(jīng)過聚光透鏡后進入比色皿。經(jīng)溶液吸收后的透射光通過光門照射在光電管上轉(zhuǎn)換為光電流信號，經(jīng)過入大后輸入檢流計，由電表直接顯示吸光度。

　　二、比色分析的測量方法

　　無論是光電比色計還是分光光度計，最常用的測量方法有如下兩種。

　�。ㄒ唬�標準曲線計

　　先配制一系列不同濃度的標準溶液，用選定的顯色劑顯色。選用合適波長的入射光（光電比色計用濾光片，分光光度計可轉(zhuǎn)動波長調(diào)節(jié)器）。測定時先以空白溶液調(diào)節(jié)透光率100%，然后分別測定標準系列的吸光度。以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標作圖得到一條通過原點的直線，叫做標準曲線（或稱工作曲線）。

　　例如，測定維生素B12時，可預(yù)先繪制維生素B12的A-c標準曲線（圖8-11），再用完全相同的方法和步驟測定被測溶液的吸光度，即可從標準曲線上找出被測溶液的濃度或含量。

　　這種方法叫做標準蛐線法。標準曲線可在固定儀器和方法的條件下多次使用，適合于經(jīng)常性工作。但若儀器不同或測定方法及條件改變，測得的標準曲線不同。因此在更換任何測定條件時都需重新繪制標準曲線。

圖8-11 維生素B₁₂的標準曲線

　�。ǘ�）直接比較計算法

　　若僅對個別樣品進行測定，且A-c曲線線性良好，可水作標準曲線而直接比較測定結(jié)果。

　　先配制一個被測物質(zhì)溶液濃度相近的標準溶液，與被測溶液在相同條件下測定吸光度。根據(jù)下式可以計算。

A_標=K_標c_標b_標

A_測=K_測c_測b_測

　　由于使用同一波長的入射光，采用同樣的比色皿，測定同樣的物質(zhì)。所以

K_標=K_測

b_標=b_測

　　因此A_標/A_測=c_標/c_測

　　則c_測=A_測/A_標×c_標

上一頁  [1] [2] [3]